抗腫瘍剤抵抗性獲得のための癌細胞による血小板貪食に関する検討

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研究1 　活性化血小板貪食癌細胞の EMT をはじめとした増殖能の評価目的:血小板貪食癌細胞の癌転移形成における病態解明これまでの実験で活性化血小板貪食癌細胞ではPTENの発現低下、浸潤能増強が見られた結果を得ていることからこれらを癌細胞の増殖能または悪性度の評価基準とした。また、活性化血小板貪食癌細胞が EMT 様の変化をしているかどうかを、形態とともに EMT marker(E-cadhelin、Vimentin、β-actin、Snail、Zeb- 1など)を用いて検討した。さらに抗癌剤Gemcitabine(GEM)単独投与または抗血小板薬単独投与、抗癌剤と抗血小板薬の併用によりこれらの変化を検討し、有用性を証明した。さらに、Panc-1 は極端な栄養飢餓条件であっても、生存することが可能な特徴を持つ。よって栄養飢餓培地(グルタミン・グルコース無し) において血小板貪食癌細胞の形態、EMTマーカー、PTEN発現、アポトーシス抵抗性などを含めた評価を行った。まずは、Panc-1 と血小板の共培養を行い、EMT マーカー(E-cadhelin、Vimentin、β-actin、Snail、Zeb-1など)を用いて評価を検討した。Panc-1 を使用するが、heterogeneity を有する癌腫であるた め、他の細胞株での評価が必要であり、腫瘍細胞 control 群として、食道癌細胞株 KES・TE-5(Podoplanin 発現)、正常株 control としてヒト臍帯静脈内皮細胞 HUVEC を使用した。また、control として休止血小板での貪食能の違いも確認した。