大腸癌オルガノイドを用いた免疫原性改善と腸管由来樹状細胞との共培養システムの構築

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免疫チェックポイント阻害剤は、免疫原性の低い MSS 大腸癌に有効ではないが、FOLFOX療法による免疫原性細胞死 (ICD) 誘導を利用すれば抗 腫瘍効果を得られる可能性がある。しかし、臨床検体では実証されていないため確認する必要がある。 本研究では、まず手術切除検体からヒト大腸癌オルガノイドを作成しFOLFOX療法によりICDが誘導されることを証明する。さらに、腸管由来樹状細胞とヒト大腸癌オルガノイドを共培養させることで、より腫瘍周囲環境に近い条件で腫瘍特異免疫を誘導されることを証明する。当該年度では、昨年度に引き続き5-FUおよび Oxaliplatin (Oxa) によるICD誘導の検証を行なった。ICDにおいて重要な因子である Calreticulin (CRT) の細胞表面への発現を中心に検証を進めた。大腸癌細胞株はHT29、HCT116 に加え、KM12C、RKOでもCRT発現の検討を進めた。HT29、HCT116で決定した至適暴露時間および至適濃度において検討したところ、KM12C、RKOでも同様に5-FU、Oxa それぞれ濃度依存的にCRTの発現上昇を認めた。続いて昨年度1例のみだったヒト大腸癌オルガノイドでの免疫組織学的染色による検証を3例に増やし、いずれもCRTが細胞表面へ発現していることを確認した。細胞株同様に、個体によらずある一定の割合で起こりうる現象であることが考えられた。4種の細胞株および3例のヒト大腸癌オルガノイドで一様にCRTの細胞表面への発現を確認した。これらの結果より、ICDにおけるCRTの細胞表面への発現は細胞種によらずある一定の割合で起こりうる現象であることを確認した。