外尿道括約筋におけるdecorinの機能解析と治療標的としての意義

尿道外括约肌中核心蛋白聚糖的功能分析及其作为治疗靶点的意义

• 批准号: 21K16742
• 负责人: 篠原 麻由香
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Oita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16742/
• 关键词: decorin; 外尿道括約筋; 尿失禁; デコリン; 細胞外マトリクス; 尿道括約筋; 細胞外マトリックス

まず、ヒト筋細胞不死化法（CyclinD1、CDK4、TERT遺伝子導入）にて不死化後、FACSにて横紋筋マーカーであるCD56陽性細胞を純化し、得た不死化ヒト外尿道括約筋細胞（US2KD）を使用した。US2KDにリポフェクション法にてdecorin遺伝子を導入してHygromycineBでselectionを行い過剰発現株（US2KD/DCN）を作成し、Growth testを施行した。また、US2KD/WTとUS2KD/DCNを分化誘導し、横紋筋分化マーカ―であるMyosin heavy chain（MHC）の発現をRT-PCRおよびWestern blotting法で比較した。Growth testでは、US2KD/DCNはUS2KD/WTと比較して有意に増加した。また、US2KD/DCNは分化誘導後、RT-PCRではUS2/DCNはUS2KD/WTと比較してMHC1の発現が有意に増加したが、MHC2の発現は減少していた。今後はUS2KDにおいてdecorinのノックダウン株を作成し、増殖分化過程における変化について検討する。現在少ない数ではあるが複数の個体から採取した外尿道括約筋をもとにそれぞれ長寿化を行っており、hTERTのみを遺伝子導入し長寿化したヒト外尿括約筋でも実験をすすめているところである。

首先，使用人类肌肉细胞永生化（Cyclind1，Cdk4，Tert基因转移）后，使用FACS纯化的CD56阳性细胞（是条纹肌肉标记），并使用了永生的人类外部外部尿道静脉括约肌（US2KD）。使用LiPofection将Decorin基因引入US2KD，并通过使用Hygromycineb选择过表达的菌株（US2KD/DCN），然后进行生长测试。此外，使用RT-PCR和Western印迹方法比较了US2KD/WT和US2KD/DCN的分化，肌球蛋白重链（MHC）的表达（MHC）（MHC）的表达是一种横纹肌肉分化标记。在增长测试中，与US2KD/WT相比，US2KD/DCN显着增加。此外，与US2KD/WT相比，RT-PCR的US2KD/DCN诱导分化后，MHC1表达显着增加，但MHC2表达降低。将来，我们将在US2KD中创建Decorin的敲低菌株，并检查扩散和分化过程的变化。目前，尽管只有少数几个，但他们正在基于从多个个体收集的外部尿道括约肌进行寿命，目前正在使用人类外部尿液括约肌进行实验，这些括约肌已被HTERT基因转染以增加其寿命。

项目成果

治療方針に苦慮している両側尿管膀胱移行部通過障害（UVJO）の一例

一例难以确定治疗策略的双侧输尿管膀胱连接部梗阻（UVJO）病例。

• 发表时间: 2021
• 作者: 篠原麻由香;秋田泰之;羽田真郎;澁谷忠正;安藤忠助;秦聡孝;三股浩光
• 通讯作者: 三股浩光

回腸導管造設術後の血液透析患者に発生した両側上部尿路腺癌の1例

血液透析患者回肠导管置入后发生双侧上尿路腺癌一例。

• 发表时间: 2021
• 作者: 篠原麻由香;中島駿佑;安部怜樹;渡辺大;岩崎和範;甲斐友喜;羽田真郎;澁谷忠正;安藤忠助;秦聡孝;三股浩光
• 通讯作者: 三股浩光

尿失禁に対する新規再生医療の開発へ向けた外尿道括約筋研究への取り組み

研究尿道外括约肌以开发治疗尿失禁的新型再生医学

• 发表时间: 2022
• 作者: 篠原麻由香;秋田泰之;花田麻里;住野泰弘;三股浩光;秦聡孝
• 通讯作者: 秦聡孝

Intestinal-type adenocarcinoma in the bilateral renal pelvis and right ureter synchronously arising in a patient with an ileal conduit

回肠导管患者双侧肾盂及右输尿管同时发生肠型腺癌

• DOI: 10.1111/pin.13218
• 发表时间: 2022
• 期刊: Pathology International
• 影响因子: 2.2
• 作者: Haruto Nishida;Mayuka Shinohara;Yoshihiko Kondo;Hiroko Kadowaki;Takahiro Kusaba;Yuzo Oyama;Toshitaka Shin;Tsutomu Daa
• 通讯作者: Tsutomu Daa