低酸素誘導因子HIF1aにより誘導されるマイクロRNAの歯髄炎進展における役割

缺氧诱导因子HIF1a诱导的microRNA在牙髓炎进展中的作用

• 批准号: 21K16989
• 负责人: 藤井 真由子
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-12-19 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16989/
• 关键词: マイクロRNA; 低酸素; 歯髄細胞; miRNA-210; IL-6; inflammation; dental pulp cell; miRNA210; 炎症; microRNA; 歯髄炎; 歯髄幹細胞

コロナによる研究室への立入制限や人数制限が緩和されてきたところであったが濃厚接触の疑いが相次いだため、研究活動を制限せざるを得なかった。そのため、特に動物実験については予定していたうちの一つのみの実施にとどまった。細胞実験に ついて研究プランにそって進めたが遅れを生じている。具体的には動物実験として、C57BL/6Jマウスの切歯を露髄させ、LPSを貼付して実験的歯髄炎を行い、その後歯髄を摘出し、microRNA（miR）並びにRNA抽出を行い、実験的歯髄炎後のmiR-210、低酸素誘導性因子hif1α、miR-210のターゲットである転写調節因子upstream transcription factor 1 （USF1）の発現挙動についてリアルタイムPCR解析で経時的に確認した。細胞実験においては基本的にプライマリーのヒト歯髄細胞を用いて実験を行った。USF1の抑制や過発現を行ったあと、LPS刺激を行い、炎症性サイトカイン産生についてリアルタイムPCR解析、FACS CBA解析を行い、RNA、タンパク産生について確認を行った。またヒト歯髄細胞におけるUSF1の発現についてmiR-210の過発現後にLPS刺激を行い、蛍光免疫染色にて細胞内での局在を確認した。同様に低酸素でインキュベーションし、LPS刺激を行い、HIF1α、USF1の発現について蛍光免疫染色やウェスタンブロットを用いて確認した。

コ ロ ナ に よ る laboratory へ の injection system limit や toll system limit が ease さ れ て き た と こ ろ で あ っ た が strong contact の suspected い い が phase time だ た め limitations, research activities を せ ざ る を have な か っ た. そ の た め, に animals be 験 に つ い て は designated し て い た う ち の a つ の み の be applied に と ど ま っ た. Cell laboratory に に て て て studies プラ にそって にそって further めたが遅れを life じて る る. Specific に は animals be 験 と し て, C57BL / 6 j マ ウ ス の cut 歯 を dew marrow さ せ, LPS を TieFu し て be 験 歯 of marrow inflammation を い, そ の 歯 after marrow を pick out し, mirnas (miR) and び に RNA extraction を い, be the 験 歯 marrow inflammation after の miR - 210, low acid hif1 alpha, miR - induced factors 210 の タ ー ゲ ッ ト で あ る planning write adjustment factor upstream transcription factor 1 (USF1) の 発 挙 now move に つ い て リ ア ル タ イ ム PCR analytic で 経 に confirmation when し た. Cells be 験 に お い て は basic に プ ラ イ マ リ ー の ヒ ト 歯 marrow cells を using い て be 験 を line っ た. Ever USF1 の inhibit や 発 line now を っ た あ と, LPS stimulation を い, inflammatory サ イ ト カ イ ン produce に つ い て リ ア ル タ イ ム PCR, both FACS CBA parse を い, RNA, タ ン パ ク produce に つ い て confirm line を っ た. ま た ヒ ト 歯 marrow cells に お け る USF1 の 発 now に つ い て miR - 210 after の 発 now に LPS stimulation を い, 蛍 light immune dyeing に て intracellular で の bureau in を confirm し た. With others in に low acid element で イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン し, LPS stimulation を い, HIF1 alpha, USF1 の 発 now に つ い て 蛍 light immune dyeing や ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト を with い て confirm し た.

项目成果

International Association for Dental Research

国际牙科研究协会

• 发表时间: 2020

Hypoxia-induced microRNA-210 regulates inflammatory cytokine expression in lipopolysaccharide-stimulated dental-pulp cells

缺氧诱导的 microRNA-210 调节脂多糖刺激的牙髓细胞中炎症细胞因子的表达

• 发表时间: 2021
• 作者: Fujii M;Kawashima N;Nara K;Noda S;Hashimoto K;Okiji T
• 通讯作者: Okiji T