単一細胞解析を利用した抗炎症性ヒト脂肪組織由来幹細胞の同定と顎関節症治療への応用

使用单细胞分析鉴定抗炎人脂肪组织来源的干细胞及其在颞下颌关节疾病治疗中的应用

• 批准号: 21K17084
• 负责人: 稲木 涼子
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K17084/
• 关键词: 脂肪細胞; シングルセル解析; 顎関節症; 間葉系幹細胞; ASC; 抗炎症作用; 脂肪由来幹細胞

ヒト脂肪細胞を単離してシングルセルRNA解析する準備のために、マウス脂肪細胞を単離して培養した。この増殖培養した細胞を回収し、FACSにてシングルセルにすることが可能であることを確認した。脂肪細胞と骨髄細胞と歯髄細胞のシングルセルRNA解析を行い、脂肪細胞の有用性を比較検討する準備を整えた。ヒトの骨髄細胞はパッセージ2まで培養し冷凍保存している。またヒト歯髄細胞は、歯を割り歯髄を取り出し、細切してコラゲナーゼ処理してエクスプラントカルチャーとして培養に成功している。これらの細胞をパッセージ２で冷凍保存を行った。今後、脂肪細胞、骨髄細胞、歯髄細胞をパッセージ3に合わせてシングルセルRNA解析を行う予定である、現在、細胞単離のためにFACS装置が故障しており、修理された時点でシングルセルRNA解析を実施する予定である。また、申請している本研究で、変形性ヒザ関節症のモデルマウスの膝関節にマウス脂肪幹細胞を投与することで、膝関節の抗炎症効果を前年度確認している。既に、この結果に基づき、再生医療等委員会にて、臨床研究の計画書は承認されている。この計画書に基づき、ヒト顎関節症の患者へ、ヒト由来脂肪の関節内投与の臨床研究の準備を行っている。外来で研究について広報し、顎関節症の2名の患者を選定するに至った。来年度、臨床研究を行うために、院内CPCにてコールドランを実施し、臨床研究プロトコルの確認と人員の実施体制と準備を整えた。

分离小鼠脂肪细胞并培养以准备分离和单细胞RNA分析。收集生长和培养的细胞，并确认可以通过FACS制造单个细胞。对脂肪细胞，骨髓细胞和牙髓细胞进行了单细胞RNA分析，并进行了制备以比较和检查脂肪细胞的有用性。将人骨髓细胞培养至通道2并储存冷冻。人类纸浆细胞也通过从牙齿上去除果肉，切割细胞并用胶原酶对其进行处理，成功培养为爆炸性培养。这些细胞通过冷冻保存将其存储在Passage 2中。将来，计划对脂肪细胞，骨髓细胞和牙髓细胞进行单细胞RNA分析，并与Passage 3结合进行。FACS设备目前未能引起细胞分离，并在修复时将执行单细胞RNA分析。此外，在此应用中，膝关节的抗炎作用是前一年通过将小鼠脂肪干细胞施用到具有骨关节炎的模型小鼠的膝关节的。基于这些结果，临床研究计划已经得到了再生医学委员会的批准。基于该计划，我们正在为颞下颌关节疾病患者的关节内脂肪进行临床研究。我们在门诊诊所宣传这项研究，并选择了两名颞下颌关节疾病的患者。为了明年进行临床研究，在医院CPC进行了冷跑，以确认临床研究方案并为人员做准备。