Single cell analysis of chondrocyte sheets to investigate the mode-of-action

软骨细胞片的单细胞分析以研究作用模式

• 批准号: 21K18058
• 负责人: 高橋 匠
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K18058/
• 关键词: 変形性膝関節症; 細胞シート; 関節軟骨; 硝子軟骨; シングルセル; 多指症; iPS細胞; 軟骨細胞; シングルセル解析

本研究では、変形性膝関節症の根治的治療を目標とした軟骨細胞シートの実用化を目指し、軟骨細胞シートの比較をシングルセルで行い、硝子軟骨修復再生に寄与する細胞集団の同定および特性解析を目的とした。これまで我々は、多指症由来軟骨細胞シートはドナーに応じて硝子軟骨修復再生効果が変動することを明らかにし、in vitroおよびin vivoの評価においてドナー選定を行ってきた。また、多指症由来軟骨細胞シートには異なる硝子軟骨修復再生効果を有する細胞集団が混在することが考えられる。そこで本年度は、硝子軟骨修復再生効果が異なる8ドナーをin vitro評価系により2群に分類し、シングルセル解析を実施した。まず、各ドナーより作製した多指症由来軟骨細胞シートより細胞を単離し、Chromium Next GEM Single Cell 3' LT Kitおよび10x Genomics Chromium Controllerを用いて1,000細胞をターゲットにシングルセル化、ライブラリー調整を行った。4.5万リード/細胞でシーケンシングを実施した。今後は、取得したデータの解析を行い、2群間において変動する細胞集団を同定し、それらの細胞集団の硝子軟骨修復再生効果への影響を検証する予定である。

The aim of this study is to provide guidance on the application of chondrocytes in the treatment of knee arthrosis, to compare chondrocytes, to analyze the identity and characteristics of chondrocytes in cartilage repair and regeneration. The results of cartilage repair and regeneration in vivo were selected from the following categories: Polydactyly is caused by chondrocytes, which are different from cartilage repair and regeneration. This year, the results of nitrate cartilage repair and regeneration are different from those of the previous year. The Chromium Next GEM Single Cell 3' LT Kit and 10x Genomics Chromium Controller are used for 1,000 cell types, cell types, and cell types adjustment. 4.5 million people/cell phone calls In the future, we will analyze the results obtained, determine the effects of cell population interaction on nitrate cartilage repair and regeneration, and evaluate the effects of cell population interaction on nitrate cartilage regeneration.