ライブセルイメージングによる抗体医薬品の細胞内凝集体に着目した品質管理機構の解明

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本研究では、抗体産生細胞内に発生する抗体凝集体の品質管理機構を明らかにすることを目的とした。これまでに、抗体凝集体を特異的に認識するペプチド（AF.2A1）を活用して生きたままの抗体産生細胞を観察する技術を開発し、細胞内凝集体と培養液中の凝集体量に相関性があること、大きな凝集体は特定の細胞内小器官に集積することを発見した（Senga et al. Cell Chem. Biol., 2021）。この結果から、抗体凝集体は培養液中で発生するのではなく細胞内で発生し、細胞から分泌されていると考えている。本研究では、AF.2A1の分子認識機能を活用して、発生する凝集体のサイズごとに細胞を選別し、それぞれの凝集体の分泌機構に関与する分子の同定に取り組んだ。令和2年度は、以下の項目を実施した。（1）ライブセルイメージングによる抗体凝集体の動態解析大部分の凝集体は細胞外へと分泌されると考えている。この仮説を証明するために、抗体凝集体の細胞内動態を共焦点顕微鏡によるタイムラプス観察を行い、細胞内で生じた抗体凝集体が分泌されるのかを観察した。その結果、細胞から分泌されている抗体粒子があることが明らかになった。また、凝集体が局在するオルガネラのマーカーとの多重染色によって、どのオルガネラを介して抗体が分泌されるのか、抗体凝集体のサイズに依存して局在するオルガネラに違いがあるかを調べた。その結果、特定のオルガネラに集積していることが明らかになった。