Development of novel psoralen conjugated triplex forming oligonucleotides and its application to a photo genome editing technology

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デオキシリボース1-位ソラレン導入型三重鎖形成核酸（Ps-TFO）の機能評価を目的とし、下記の三項目について実施した。1.　1-位ソラレン導入型デオキシリボースのアミダイト合成と核酸配列への導入：市販で入手可能なデオキシリボース誘導体を出発原料とし、10工程の合成反応を用いた構造変換により、1-位ソラレン導入型デオキシリボースのアミダイト化合物の合成に成功した。合成したアミダイトはホスホロアミダイト法によって核酸配列中へと導入し、目的とするPs-TFOの合成を達成した。2.　合成したPs-TFOの三重鎖形成能評価：合成したリンカー長の異なる二種のアミダイトをそれぞれ導入したPs-TFOの三重鎖形成能評価をTm解析システムを用いて実施した。標的二重鎖のうち、片側一本鎖にプリン塩基を多く含有する配列でないと安定した三重鎖構造形成は不可能である。つまりこのプリン豊富な一本鎖中に含まれるピリミジン塩基部位（ミスマッチ部位）は三重鎖構造の不安定化を招く原因となる。一方、今回合成したPs-TFOのソラレン導入部位を、このミスマッチ部位に相当する位置に配置し、三重鎖を形成させた場合、ピリミジン塩基との相互作用と考えられるソラレンのインターカレーションにより、ソラレン非導入型のTFOよりも形成される三重鎖構造が優位に安定化されていることが分かった。この結果は、今回合成したPs-TFOにより、三重鎖の標的配列が拡張できる可能性を示唆するものである。3.　合成したPs-TFOの架橋体形成能評価：合成したPs-TFOの標的二重鎖に対する架橋能を変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動により評価した。その結果、ピリミジン塩基（チミン、シトシン）と効率的に二架橋体形成することが分かり、不可逆的な三重鎖構造が形成できることが分かった。