Elucidation of chromatin structure produced by CENP-B acidic region and application to new synthetic transcription factors.

CENP-B酸性区产生的染色质结构的阐明及其在新合成转录因子中的应用。

• 批准号: 22K14866
• 负责人: 大竹 興一郎
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Kazusa DNA Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K14866/
• 关键词: CENP-B; エピジェネティクス; クロマチン構造制御; 酸性アミノ酸ドメイン; ヒト人工染色体; 遺伝子発現制御; セントロメア; 酸性ドメイン

動物、植物の違いなく、細胞に物質を生産させるために重要なのが、遺伝子発現の制御であり、それには遺伝子、さらには、その制御領域のクロマチン構造のエピジェネティックな制御が重要である。遺伝子発現カセットを導入し、多数の発現株を取得しても、発現レベルのバラつきや、発現を長期に維持できない場合があり、その原因の一つは、遺伝子発現カセット上のクロマチンがエピジェネティックに変化していくためである。申請者は、これまでの研究によって、ヒトセントロメア由来の反復DNA(アルフォイドDNA)上のCENP-B box配列へ結合するタンパク質、CENP-Bの結合が、クロマチン交換を促す性質を持ち、さらに様々なヒストン修飾因子、クロマチンリモデリング因子の集合を促進することを見出し、それがCENP-Bが持つ巨大な酸性アミノ酸ドメインの働きであることを同定した。本研究は、(1)酸性ドメインがクロマチン構造に与える影響のメカニズムの解明と、(2)この性質を利用したエピジェネティックなクロマチン構造変換を介した新型合成転写制御因子の開発、二つの計画から構成されている。2022年度は、両方の計画で使用するためのエフェクター構築として、酸性ドメインのN末端に、tetオペレーター(tetO)配列への結合タンパク質tetリプレッサー(tetR)および、CENP-B box結合ドメインであるCENP-B DBD(DNA binding domain)を融合させたタンパク質を発現させるプラスミドを作製し、これらを細胞に導入することで、目的のタンパク質の発現と、それらがクロマチン上へ結合していることをクロマチン免疫沈降解析によって確認した。

Animals, plants and animals, cells and substances, production and production, important and important, remaining control and control of animals and plants, and control.には缝子, さらには, そのcontrolled domain のクロマチンstructural のエピジェネティックなcontrolled がimportant である. The remaining seeds are introduced, the majority of the strains are acquired, the のベルのバラつきや, and the long-term maintenance is maintained合があり, そのcause の一つは, 缝子発 appear カセット上のクロマチンがエピジェネティックに変化していくためである. CENP-B on the applicant's は、これまでの Research によって、ヒトセントロメアの Repeated DNA (アルフォイドDNA) The combination of box arrangement and quality, CENP-B's combination, クロマチン exchange and promotion of nature and holding ち, さらに様々なヒストン modification factor, クロマチすることを见出し、それがCENP -Bがhold つ huge acid アミノ acid ドメインの働きであることを同定した. In this study, (1) the explanation of the structure and influence of acidic acidic water and its influence, (2) the utilization of its properties The エピジェネティックなクロマチン structure is replaced by the new synthetic control factor の开発, and the second つの plan is composed of されている. In 2022, the plan for the year 2022 uses the するためのエフェクターconstructed として, the acidic ドメインのN terminal に, tet CENP-B box binding CENP-B DBD (DNA binding domain)をfusionさせたタンパクqualityを発appearsさせるプラスミドをproductionし、これらをcellに Importすることで、Purposeのタンパク性の発appearと、それらがクロマチン上へcombinationしていることをクロマチンimmunosedimentation analysisによってconfirmationした.