昆虫細胞に特異なバキュロウイルスレセプターの同定

昆虫细胞特异性杆状病毒受体的鉴定

• 批准号: 22K14898
• 负责人: 横田 早希
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K14898/
• 关键词: バキュロウイルス; 昆虫細胞; 受容体; BioID; TurboID

バキュロウイルスAutographa californica nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) の出芽ウイルス（BV)は昆虫細胞での遺伝子発現ベクターとしてバイオ医薬品の製造等に利用されている。AcMNPV-BVの宿主への侵入は，AcMNPV-BV表面のエンベロープタンパク質GP64が，昆虫細胞表面の特異的レセプターと結合することで開始され，エンドサイトーシスにより取込まれる。これまでに昆虫細胞表面の膜タンパク質がレセプターであることが示唆されているが，このレセプターは未だ明らかになっていない。また，AcMNPV-BVは昆虫細胞と比べて効率は低いものの，一部を除く哺乳動物細胞にも侵入できるため遺伝子治療用ベクターとしての応用も期待される。哺乳細胞への侵入においてはヘパラン硫酸プロテオグリカンをレセプターとして利用するが，昆虫細胞 (Spodoptera frugiperda, Sf9) への侵入においてヘパラン硫酸は必須ではないことが報告されている。したがって，昆虫細胞における効率的なBV侵入には昆虫細胞特有のレセプターの存在が重要である。申請者はこれまでに“近位依存性ビオチン標識 BioID法およびTurboID法”を用い，2つのレセプター候補タンパク質を見出した。本研究ではこれらのレセプター候補タンパク質を同定し，さらにこれらの候補タンパク質が，Sf9昆虫細胞におけるAcMNPV-BVレセプターとして機能するのかを明らかにすることを目的とする。これまでに，BioID法で見出した候補タンパク質はすでに同定していることから，本年度はTurboID法で新たに見出された72 kDaの候補タンパク質について液体クロマトグラフィータンデム質量分析 (LC-MS/MS) により同定することを試みた。

Autographa californica nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) sprouts, buds, buds The host of AcMNPV-BV virus invades, the surface of AcMNPV-BV is infected, the cell surface of insect is infected with the virus, and the cell surface of the insect is characterized by the combination of the virus and the virus. The membrane on the cell surface of the insect is not clear, but it is not clear. The rate of AcMNPV-BV insect cell is lower than that of breast-feeding animal cell. One film except lactation animal cell invades and treats children. The lactation cell invades the cell and makes use of the cell (Spodoptera frugiperda, Sf9) to invade the cell. The sulphuric acid must be properly reported. The rate of BV invasion of insect cells is higher than that of insects. The applicant is aware of the BioID method, the TurboID method, and the application of the TurboID method. The purpose of this study is to determine whether or not the target is the same, and that the Sf9 insect cell is responsible for the AcMNPV-BV response. This study is based on the results of the study. The BioID method has been used to determine the accuracy of the data. This year, the new TurboID method has shown that the 72-year-old kDa has been published in the first half of the year. This year, it has been reported that there is a significant difference between the two groups in terms of the number of liquids, the number of liquids, the level of quantitative analysis (LC-MS/MS) and the level of determination.