昆虫細胞に特異なバキュロウイルスレセプターの同定

昆虫细胞特异性杆状病毒受体的鉴定

• 批准号: 22K14898
• 负责人: 横田 早希
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K14898/
• 关键词: バキュロウイルス; 昆虫細胞; 受容体; BioID; TurboID

バキュロウイルスAutographa californica nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) の出芽ウイルス（BV)は昆虫細胞での遺伝子発現ベクターとしてバイオ医薬品の製造等に利用されている。AcMNPV-BVの宿主への侵入は，AcMNPV-BV表面のエンベロープタンパク質GP64が，昆虫細胞表面の特異的レセプターと結合することで開始され，エンドサイトーシスにより取込まれる。これまでに昆虫細胞表面の膜タンパク質がレセプターであることが示唆されているが，このレセプターは未だ明らかになっていない。また，AcMNPV-BVは昆虫細胞と比べて効率は低いものの，一部を除く哺乳動物細胞にも侵入できるため遺伝子治療用ベクターとしての応用も期待される。哺乳細胞への侵入においてはヘパラン硫酸プロテオグリカンをレセプターとして利用するが，昆虫細胞 (Spodoptera frugiperda, Sf9) への侵入においてヘパラン硫酸は必須ではないことが報告されている。したがって，昆虫細胞における効率的なBV侵入には昆虫細胞特有のレセプターの存在が重要である。申請者はこれまでに“近位依存性ビオチン標識 BioID法およびTurboID法”を用い，2つのレセプター候補タンパク質を見出した。本研究ではこれらのレセプター候補タンパク質を同定し，さらにこれらの候補タンパク質が，Sf9昆虫細胞におけるAcMNPV-BVレセプターとして機能するのかを明らかにすることを目的とする。これまでに，BioID法で見出した候補タンパク質はすでに同定していることから，本年度はTurboID法で新たに見出された72 kDaの候補タンパク質について液体クロマトグラフィータンデム質量分析 (LC-MS/MS) により同定することを試みた。

Autographa californica nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) is a new type of virus that can be used in the production of pharmaceutical products. The invasion of AcMNPV-BV by host cells begins with the surface modification of the AcMNPV-BV protein GP64 and the specific binding of the insect cell surface. The membrane covering the surface of insect cells can be seen on the surface of the insect cells, but the surface of the insect cells is not clearly defined. AcMNPV-BV has a lower efficiency than insect cells and is expected to be used for treatment in some mammalian cells. Mammalian cells are invaded by sulfuric acid, and insect cells (Spodoptera frugiperda, Sf9) are invaded by sulfuric acid. Insect cell invasion is important for the existence of insect cell-specific viruses. The applicant responds to the "Proximity Dependency Identification BioID Method" and "TurboID Method," and 2. The candidate quality is shown. In this study, we determined the identity of the candidate species, and the purpose of determining the identity of the candidate species in Sf9 insect cells. In this regard, BioID method has been found to be a candidate for quality control, and this year TurboID method has been newly found to be a candidate for quality control of 72 kDa liquid quality control (LC-MS/MS).