マナマコ体腔細胞が形成する微小環境の特性解析

Manma mako 体腔细胞形成的微环境的表征

• 批准号: 22K14949
• 负责人: 田口 瑞姫
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K14949/
• 关键词: マナマコ; 棘皮動物; 微小環境; 幹細胞ニッチ; 体腔細胞; 凝集塊; 棘皮動物マナマコ; 組織修復・再生; 免疫細胞; 腸排出

棘皮動物マナマコの体腔細胞は凝集能に優れており、何らかの刺激を受けるとすみやかに凝集して巨大な凝集塊を形成する。申請者の先行研究により、凝集塊は腸排出したマナマコの体内に残存した腸切断面を被覆すること、また、凝集塊の内部構造は、組織幹細胞の維持・分化を制御する幹細胞微小環境（ニッチ）の構造と非常に類似した網目状のネットワーク構造を示すことが明らかになった。本研究は、損傷組織を被覆した凝集塊における各種体腔細胞の分布および凝集塊特異的な遺伝子発現パターンを調べ、凝集塊が組織幹細胞ニッチ様の特徴を示すのかを明らかにすることを目的としている。研究室にはマナマコを年間通して維持できる環境が整っていないため、今年度は、まずマナマコの飼育環境を整備した。新たに水槽設備（飼育水槽、ポンプ、濾過槽、クーラー等）を購入し、マナマコを常に維持できる環境を用意した。次に、体腔細胞の凝集塊および幹細胞様の特徴を示す未分化様細胞のトランスクリプトーム解析を行うため、細胞群の単離を試みた。まず、マナマコ体腔液をシリンジで採取し、細胞凝集を防ぐためEDTAを添加した。体腔液を目視したところ、多くの寄生虫が見つかり、巨大な凝集塊も観察された。顕微鏡下で体腔細胞数を計測した結果、通常と比較して非常に多くの体腔細胞が含まれていることがわかった。寄生虫の存在により免疫応答が惹起され、体腔細胞数の増加および凝集塊形成が促進されたことが予想される。正常時の遺伝子発現パターンが得られないと判断し、トランスクリプトーム解析用のサンプリングは中断した。マナマコの体内に寄生する生物についての報告は少なく、寄生虫に対する生体防御機構はよくわかっていない。今回の寄生虫感染個体は宿主免疫応答を調べる良いサンプルになりうるため、体腔細胞および各組織は4%PFA固定し、4℃で保存した。

The agglutination of coelomocytes of echinoderms can cause the formation of large agglutination blocks. The applicant's advanced research on the intestinal excretion of agglomerates, the remaining remains in the body, the intestinal section section, the internal structure of the agglutinates, and the tissue stems The structure of the cell maintenance and differentiation control stem cell microenvironment (ニッチ) is very similar to the mesh-like structure of the stem cell microenvironment. This study examines the distribution of various coelomocyte cells and the appearance of agglutinates that are coated with damaged tissue.ターンを动べ, agglutination block が tissue stem cell ニッチ様の特徴をshows すのかを明らかにすることをpurpose としている. The laboratory maintains the breeding environment throughout the year, maintains the breeding environment, and maintains the breeding environment this year. New water tank equipment (breeding tanks, manokins, filter tanks, filter tanks, etc.) are purchased and used to maintain a healthy environment. Second, the agglutination of body cavity cells, the stem cells, the special characteristics of the undifferentiated cells, and the analysis of the undifferentiated cells.まず, マナマコ body cavity fluid をシリンジで is taken, cell agglutination is prevented and EDTA is added. Body cavity fluid can be visually inspected, multiple parasites can be seen, and giant agglomerates can be inspected. The results of measuring the number of coelomocytes under a microscope are usually very high compared to the number of coelomocytes. The presence of parasites causes immune responses and increases the number of body cavity cells and promotes agglutination formation, which is why we think about it. Normally, the の伝子発 appear パターンが得られないと judgment し, トランスクリプトーム analytic use のサンプリングは interrupt した.マナマコの内にparasitic するorganism についてのreport は小なく, parasite に対するbiotic defense agency はよくわかっていない. This time, the parasite-infected individual's host immune system was adjusted and the coelomocyte cells were fixed in 4% PFA and stored at 4°C.