ヒトiPS細胞由来肝オルガノイドによるヒトHSC増殖支持機構の解明

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ヒトiPS細胞由来肝芽細胞(iHep)・同由来星状間質細胞様細胞(iSC)・同由来類洞内皮細胞様細胞(iSEC)をそれぞれ5:1:4の割合でスフェロイドを形成させ、マトリゲルに封入し(総細胞数1.0-4.5x10^7)NSGマウスに移植した。しかし、HSCを直接移植するに足る十分な大きさの移植片が形成されなかった。そこで、上記構成の移植物に同数のHuVEC及びヒト成人骨髄由来間葉系間質細胞を混合したところ、十分な大きさの移植片の形成が認められた。また、この移植片はわずかに血管構造を認めた。この移植片にヒト臍帯血由来CD34強陽性CD133陽性造血幹細胞を移植したところ、移植片内においてヒトCD45陽性細胞の生着が認められた。この移植片のうち、増殖を認めたものは、主にヒト間葉系間質細胞であり、iHepは依然として増殖しないままであった。そこで、14日間のin vitroにおけるiHepの増殖様式を検討した。その結果、ヒトiPS細胞より分化誘導開始後7日前後、CXCR4陽性difinitive endoderm様細胞からHNF4α陽性AFP陽性細胞に到る段階において、HGFRアゴニストDihexa及びCHIR99021、Y-27632、A-8301、iMatrix-511存在下で、約50-100倍程度に増殖することが観察された。今年度は、移植後増殖可能なiHepの分化段階及び移植剤の条件を検討し、ヒト臍帯血造血幹細胞を支持する胎児肝様環境構築を目指す。