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ハコネサルオガセ再合成系を用いた地衣類の新たな共生メンバーと共生遺伝子の解明

使用再合成系统阐明地衣的新共生成员和共生基因

基本信息

批准号：
22K15172
负责人：
河野美恵子
金额：
$ 2.91万
依托单位：
The Graduate University for Advanced Studies
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15172/
关键词：
再合成実験長期培養形態変化条件検討地衣類三者共生

项目摘要

ハコネサルオガセ共生系を用いて地衣類が共生菌・共生藻・共生バクテリアの三者共生系であることを実験的に示すため2022年度は以下の条件検討を行なった。ハコネサルオガセに由来する共生バクテリアSphingomonas sp.は共生藻との混合培養によってのみ実験室での培養が可能である。培養時バクテリアは藻細胞の表面に局在し単独コロニーを形成しないが、GFPを発現する共生バクテリア株を作製するためには単独コロニーが必要となる。そこで、共生バクテリアが藻細胞から遊離する培養条件を検討し明らかにした。GFP発現株を作製した後は実験室条件下で共生菌、共生藻、共生バクテリアの混合培養によって共生体を再合成しバクテリアの局在を蛍光顕微鏡で観察する予定であるため、共生体を用いた試料作製の手順・条件を検討し調整した。また共生体の再合成実験の条件を再検討した結果、これまでより長期間共生体の培養が可能になり、さらに長期間培養した方がバクテリアを加えた場合と加えなかった場合で共生体の表面構造や長さなどの差が顕著になることが明らかになった。バクテリアを加えると表面を覆う皮層がより厚く均一になると考えられる。研究計画ではバクテリアを加えた場合と加えなかった場合で全トランスクリプトーム比較を行う予定であるため、リボソームRNA除去に必要となる共生菌、共生藻、共生バクテリアのrRNA配列と相補的なプローブ配列を作製した。また、現在24のscaffoldからなる共生バクテリアゲノムをより繋げるためOxford Nanopore社のMinIONを用いたロングリードシーケンスを行ない、高分子DNAの抽出方法を確立した。

The following conditions are discussed in 2022: It is possible to cultivate symbiotic algae in a mixed culture chamber. When cultured, it is necessary to form a single cell on the surface of the algae cell and to control the symbiotic growth of the algae cell by GFP. The culture conditions of algae cells were investigated. After GFP was produced, the symbiotic bacteria, symbiotic algae and symbiont were mixed and cultured in the laboratory, and the symbiont was synthesized and observed under the microscope. The procedure and conditions for the preparation of symbiont samples were discussed and adjusted. The conditions for the recombination of symbionts were re-examined. The results showed that the long-term symbionts could be cultured. The long-term symbionts could be cultured in different conditions. The surface structure of symbionts was different. If the surface is covered with leather, the thickness will be uniform. The research plan is to compare the total number of symbiotic bacteria, symbiotic algae and symbiotic rRNA sequences and complementary sequences in the case of increasing the number of cases. The method for extracting polymer DNA was established by using MinION from Oxford Nanopore Corporation.