リンパ管による生体局所の物質・水循環調節機構の解析

淋巴管局部物质/水循环调节机制分析

• 批准号: 22K15366
• 负责人: 諸岡 七美
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15366/
• 关键词: リンパ管; 生体イメージング

微小循環におけるリンパ管の物質取り込み機構を明らかにすることを目的に、令和四年度は、生きた動物を用いたリンパ管および物質動態の観察手法の構築をおこなった。まず、リンパ管特異的に蛍光蛋白質が発現するモデル動物(Vegfr3-Gap43-Venus BAC Tgマウス、Watanabe, 2019, PLoS One)を用いてリンパ管を可視化し、２光子励起顕微鏡による生体光イメージングを試みた。生体組織では傷害が生じると、血管透過性の亢進による組織圧の変動や免疫細胞の集積・過剰な活性化が起こり、正常なリンパ管機能を計測する事が困難となる。そのため、外科的手術が不要であり、非侵襲で観察が可能な耳介を観察部位として選択し、生きたままの動物でリンパ管を観察できることを確認した。次に、リンパ管を介した物質循環動態の直接計測を実施するために、蛍光トレーサーのリンパ管への取り込みをライブイメージングにより観察した。具体的には、蛍光トレーサー（TRITC-dextran等）を尾静脈注射によって血管内に注入した後に、血管の一部を光刺激によって傷害し人工的に間質への漏出を誘導、直後から２光子顕微鏡を用いたタイムラプス観察をおこなった。その結果、間質に漏出したトレーサーがリンパ管内腔に取り込まれる様子を経時的に観察することに成功した。さらに、取得した画像からトレーサーの蛍光強度変化を時空間的に解析することで、取り込み部位やリンパ流の方向等の推定も試みた。さらに、ライブイメージング終了後には免疫染色を実施し、生体観察をおこなった部位の細胞間接着構造や周皮細胞の有無を調べ、リンパ管の物質取り込み部位と構造的特徴との比較もおこなった。これらの生体イメージング及び免疫染色の結果を統合して理解することで、リンパ管の取り込み機構を明らかにできると考えられる。

在2022年，我们建立了一种使用活动物观察淋巴管和材料动力学的方法，目的是阐明微循环中淋巴管的物质吸收机制。首先，使用模型动物可视化淋巴管，其中荧光蛋白在淋巴管（VEGFR3-GAP43-VERUS BAC TG小鼠，Watanabe，2019，Plos One）中特异性表达，并尝试使用两光子激发显微镜尝试使用Biophoto成像。当生物组织发生损伤时，组织压力会因血管渗透性增加而变化，免疫细胞积累和过度激活，因此难以测量正常的淋巴功能。因此，已经确认不需要手术手术，并且可以选择非侵入性的PINNA作为观察部位，并且可以在活动物中观察到淋巴管。接下来，为了通过淋巴管直接测量材料血流动力学，通过实时成像观察到荧光示踪剂对淋巴管的摄取。具体而言，将荧光示踪剂（TRITC-滴Extran等）注射到血管中后，尾静脉注射后，一部分血管受到光刺激受伤，从而导致人造渗出到间质组织中，并通过两光子显微镜立即将延时观测带到室内泄漏。结果，随着时间的流逝，我们成功地观察到了如何将被泄漏到间质组织的示踪剂被吸入淋巴管中。 Furthermore, by analyzing the changes in fluorescence intensity of the tracer from the acquired images, we also attempted to estimate the uptake site and the direction of lymph flow, etc. Furthermore, after the live imaging was completed, immunostaining was performed to examine the intercellular adhesion structure and the presence of pericytes at the site where the organism was observed, and to compare the site of substance uptake in lymphatic具有结构特征的船只。人们认为，通过整合和理解这些生物成像和免疫染色的结果，可以阐明淋巴管摄取的机制。

项目成果

生体局所におけるリンパ管の物質取り込み機構の解析

生物区域淋巴管物质摄取机制分析

• 发表时间: 2022
• 作者: S.Ishii;N. Fukuda;諸岡七美，本藏直樹，佐野秀人，浦野哲盟，鈴木優子
• 通讯作者: 諸岡七美，本藏直樹，佐野秀人，浦野哲盟，鈴木優子