Analysis of cell wall remodeling of filamentous fungi focusing on the functions of alpha-1,3-glucanases

聚焦α-1,3-葡聚糖酶功能分析丝状真菌细胞壁重塑

• 批准号: 22K15464
• 负责人: 宮澤 拳
• 金额: $ 3万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15464/
• 关键词: 糸状菌; 細胞壁; α-1,3-グルカン; 糖質加水分解酵素; 細胞壁多糖; 再構築

細胞壁は絶えず再構築が繰り返されているが、その機構は関与する酵素の活性の解析を通して予測するしかなかった。本研究では病原性糸状菌Aspergillus fumigatusにおけるα-1,3-グルカナーゼに着目し、細胞壁再構築機構と本菌の病原性について解析しようとするものである。令和４年度には、A. fumigatusの7種のα-1,3-グルカナーゼ遺伝子についてリアルタイムPCRにてその発現量を解析し、うち3種（Agn2, Agn4, Agn5）が主に機能していることが示唆された。そこで、上記3種についてピキア酵母の発現系を構築し、精製酵素を得た。α-1,3-グルカンを基質として3種の酵素の加水分解活性を評価したところ、Agn2, Agn5については加水分解物が観察された一方、Agn4については加水分解活性が認められなかった。また、令和４年度にはA. fumigatus α-1,3-グルカンの再構築機構を解析する目的で、A. fumigatusの培養時間ごとの細胞壁α-1,3-グルカン量と分子量を評価した。その結果、α-1,3-グルカン量は培養24-72時間で明瞭な変化はなかったものの、α-1,3-グルカン分子量は培養後期に低下する傾向が認められた。令和４年度には更に、α-1,3-グルカナーゼの酵素活性評価に用いるため、3種存在するα-1,3-グルカン合成酵素遺伝子（ags1, ags2, ags3）のそれぞれの高発現株を作製し、菌糸細胞からα-1,3-グルカンを得た。現在、各株由来のα-1,3-グルカンの化学構造解析およびα-1,3-グルカナーゼによる加水分解活性について評価を進めている。

The analysis of the activity of enzymes in the cell wall was analyzed by the analysis of the activity of enzymes in the cell wall and the cell wall. In this study, the pathogenicity of Aspergillus fumigatus pathogenic bacteria was analyzed in this study. The pathogenic bacteria were isolated from the pathogenic bacteria. Ling and 4 years of production, A. fumigatus 7 kinds of alpha-1 cohort 3-the number of PCR products was analyzed, and three kinds of (Agn2, Agn4, Agn5) monitoring machines were used to show that they were instigated. There are three kinds of yeast strains, such as yeast yeast, yeast yeast, yeast yeast and yeast yeast. The hydrolytic activity of three enzymes, the hydrolytic activity, the Agn2, the Agn5, the hydrolysate, the hydrolysate, the Agn4 enzyme, the hydrolytic enzyme, the hydrolysate, the hydrolytic enzyme, the hydrolyzed enzyme, the hydrolyzed enzyme, Fumigatus, Ling and 4 years of study A. Fumigatus α-1 recombination machine analyzed the cell wall α-1 and molecular weight of the cell wall of A. Ling and A. in the time of incubation. The results showed that it was clear that the molecular weight of α-1 ~ (- 1) and α-1 ~ (- 1) was lower than that in the later stage. Ling he 4 years old, alpha-1 miramine 3-mycelium enzyme activity assay, three kinds of ags1, ags2, ags3 synthetic enzyme homozygous strains were successfully used, and the mycelium alpha-1 mycelium alpha-1 mycelium was successfully used. Now, the chemical analysis of the origin of each plant, the chemical composition of the plant, the chemical composition of the plant, the chemical analysis of the plant.

项目成果

Analyses of function and biosynthesis of cell wall alpha-1,3-glucan in Aspergillus fumigatus

烟曲霉细胞壁α-1,3-葡聚糖的功能及生物合成分析

• 发表时间: 2023
• 作者: Ken Miyazawa;Takashi Umeyama;Shogo Takatsuka;Yasunori Muraosa;Yasutaka Hoshino;Keietsu Abe;Yoshitsugu Miyazaki
• 通讯作者: Yoshitsugu Miyazaki