权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

NISレポーター遺伝子の変異を応用した高感度生体移植後細胞モニタリング法の開発

利用NIS报告基因突变开发活体移植后高灵敏度细胞监测方法

基本信息

批准号：
22K15581
负责人：
能勢直子
金额：
$ 3万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞治療は革新的な治療法の一つとして期待されているが、投与された細胞がいつどのように生体内に分布すれば治療効果向上に繋がるのかは未だ不明である。そこで本研究では、ラジオアイソトープを利用した高感度イメージングを用いて、レポータータンパクであるナトリウム/ヨウ素共輸送体(NIS)を事前に治療細胞に発現させることで、生存投与細胞の体内分布を高感度かつ長期的に追跡可能な細胞トラッキング法の確立を目指す。特に本プロジェクトでは、NIS遺伝子の野生型と変異型の基質特異性が異なる点に着目し、トレーサ集積を増やして細胞検出感度の向上を目指している。具体的には、核医学レポータータンパクの１つであるNISを移植用細胞に発現させておき、反復的に移植後細胞の放射性同位元素取り込み量を測定し、長期的な生体移植後細胞の動態と生着能を評価する。さらにNIS遺伝子の野生型と変異型では基質特異性が異なり、遺伝子型ごとに異なる放射性同位元素を取り込むという性質を利用し、異なる遺伝子型のNISを発現させた複数種の細胞を同時移植し、各々の動態と生着能の違いを確認し、検出システムを最適化する。今年度は、NIS遺伝子変異型の遺伝子合成を行い、各遺伝子をプラスミドベクターへ組み込むことに成功した。現在、幹細胞に野生型NIS遺伝子を発現させたNIS発現細胞株の作成に成功し、動物実験に供する為、安定的に継代している。NIS発現細胞株を用いたin vitro実験では、取り込み時間や培地や阻害薬の影響など条件検討を行い、NISの活性評価を行った。また、健常動物におけるNISの生理的トレーサ集積を確認するため、小動物用SPECTおよびPET装置を用いて、健常マウス生体内での放射性同位元素の分布をイメージングし、定量評価を行った。

Cell therapy is an innovative treatment method, and it is expected that the treatment effect will be upward and upward. This study aims to establish a method for the identification of highly sensitive, long-term, and potentially viable cell distribution by using highly sensitive, highly sensitive, and highly sensitive protein co-transporters (NIS) to treat cells in advance. In particular, the wild-type and heterotypic stroma specificity of NIS genes are different from each other, and the cell sensitivity is increased. For specific purposes, the development of NIS cells for transplantation, the determination of radioisotope concentrations in cells after repeated transplantation, and the evaluation of cell viability after long-term transplantation are discussed. The wild type and heterotype of NIS gene are different in matrix specificity, different in gene type, different in radioactive isotope, different in gene type, different in gene type. This year, NIS gene diversity gene synthesis is in progress, and each gene is successfully selected for the first time. Now, stem cell wild-type NIS gene has been developed, NIS cell lines have been successfully produced, and stable generations have been established in animals. NIS is developed in vitro and evaluated for its activity in vitro. The distribution of radioactive isotopes in healthy animals was determined by SPECT and PET.