KRAS変異型大腸癌に対するASNS阻害剤開発と治療予測バイオマーカーの探索

ASNS 抑制剂的开发并寻找 KRAS 突变结直肠癌的治疗预测生物标志物

• 批准号: 22K15604
• 负责人: 花田 圭太
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15604/
• 关键词: アスパラギン; ASNS; スフェロイド; Macropinocytosis; 代謝

アスパラギン合成酵素 (ASNS) 阻害作用を有するヒット化合物 (AS5) をもとにしたリード化合物の候補 5種類を、In vitro細胞増殖アッセイにおいて評価した。結果、IC50はおおよそ400-500μMと有効な化合物とはいえず、さらなる候補化合物の検討が必要であった。一方、患者由来大腸癌スフェロイド (PDS) 37株のASNS発現を免疫組織染色で評価したところ、12株 (32.4%) でASNS発現が高く、25株 (67.6%)でASNS発現が低いことが分かった (Cells. 2022;11(20):3273)。ASNS発現が高いPDS 2株を用い、shRNAを用いASNSをノックダウン株を樹立した。ASNSのノックダウンはウエスタンブロットにより確認した。その2株を用いて、In vitroにおいて細胞増殖を評価したところ、アスパラギン枯渇培地ではASNSノックダウン株はコントロール株と比べて細胞増殖が抑制された。また、L-asparaginaseを投与したところASNSノックダウン株はコントロール株と比べて細胞増殖が抑制された (Cells. 2022;11(20):3273)。In vivoでASNSノックダウン株において腫瘍増殖を評価したところ、L-asparaginase投与群はvehicle群と比べ腫瘍増殖抑制効果を認めた (Cells. 2022;11(20):3273)。

5 candidate compounds for inhibition of ASNS The results showed that IC50 was 400-500μM, and it was necessary to search for candidate compounds. 37 strains of ASNS were detected in one patient with colorectal carcinoma (PDS), 12 strains (32.4%) showed high ASNS, 25 strains (67.6%) showed low ASNS. 2022;11(20):3273)。ASNS has discovered that it can use high-tech PDS 2 strain and shRNA ASNS can use it. ASNS is not allowed to use it for identification purposes. The two strains were used for cell proliferation evaluation, and the two strains were used for cell proliferation inhibition. Cell proliferation was inhibited by the administration of L-aspartate. 2022;11(20):3273)。In vivo, ASNS can be used to evaluate the proliferation of Cells, L-aspartase can be used to control the proliferation of cells. 2022;11(20):3273)。