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疾患感受性HLAを標的としたNMOSD発症前駆期モデルの創出

创建针对疾病易感 HLA 的 NMOSD 前驱模型

基本信息

批准号：
22K15644
负责人：
別府祥平
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15644/
关键词：
視神経脊髄炎スペクトラム障害 NMOSD HLA

项目摘要

本研究課題では、まずNMOSDの疾患感受性アレルであるHLA-DQA1*05:03の分子学的特徴および、標的抗原であるAQP4との免疫応答能をin vitroおよびバイオインフォマティクス解析にて明らかとすることを目標とした。自己免疫疾患において、特定のHLAアレルが疾患感受性に寄与するメカニズムは疾患により様々な機序が報告されているが、その細胞表面発現量に着目し、疾患リスクとの関連を示すデータが国内外で複数報告されている。そこでまずHLA Labolatoryのデータバンクを参照し日本人で存在するHLAアレルを対象に、プラスミドベクターを用いて複数の組み合わせのHLA-DQA1、 DQB1アレルをHEK293細胞に一過性トランスフェクションし、フローサイトメトリーによってHLA-DQの細胞表面発現量を測定した。その結果、HLA-DQA1*05:03の細胞表面発現量が最も高いことが確認された。内在性コントロールとしてGFPを発現可能なpcDNA3.1(+) IRES GFPプラスミドベクターを活用し、トランスフェクション効率を補正した場合も同様の結果であった。また、結合ペプチドが細胞表面発現量に与える影響を調べるため、既報でT細胞エピトープとして報告されているimmunodominant AQP4ペプチドとこれらのHEK293細胞の共培養を行ったが、いずれのペプチドにおいても細胞表面発現量におけるHLA-DQA1*05:03の優位性は保たれた。現在NMOSD患者のPBMC（Peripheral Blood Mononuclear Cells）を収集しており、HLA-DQA1*05:03陽性PBMCを用いた解析を進めることを検討している。

This study aims to identify the molecular characteristics of HLA-DQA1*05:03 and the immune response of AQP4 to NMOSD. The mechanism of immune diseases, the susceptibility of specific HLA antigens, and the expression of cell surface antigens have been reported in many domestic and foreign reports. HLA-DQA1 and DQB1 were detected in HEK293 cells using a combination of HLA-DQA1 and HLA-DQA1 proteins in the presence of HLA-DQA1 and HLA-DQA1 proteins in the presence of HLA-DQA1 proteins in Japanese. The results showed that HLA-DQA1*05:03 was the highest on the cell surface. Inherent GFP may be found in pcDNA3.1(+) IRES GFP, but it may be used to correct the efficiency of GFP. The superiority of HLA-DQA1*05:03 in the co-culture of HEK293 cells was maintained. PBMC (Peripheral Blood Mononuclear Cells) from NMOSD patients were collected and analyzed by HLA-DQA1*05:03.