疾患感受性HLAを標的としたNMOSD発症前駆期モデルの創出

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本研究課題では、まずNMOSDの疾患感受性アレルであるHLA-DQA1*05:03の分子学的特徴および、標的抗原であるAQP4との免疫応答能をin vitroおよびバイオインフォマティクス解析にて明らかとすることを目標とした。自己免疫疾患において、特定のHLAアレルが疾患感受性に寄与するメカニズムは疾患により様々な機序が報告されているが、その細胞表面発現量に着目し、疾患リスクとの関連を示すデータが国内外で複数報告されている。そこでまずHLA Labolatoryのデータバンクを参照し日本人で存在するHLAアレルを対象に、プラスミドベクターを用いて複数の組み合わせのHLA-DQA1、 DQB1アレルをHEK293細胞に一過性トランスフェクションし、フローサイトメトリーによってHLA-DQの細胞表面発現量を測定した。その結果、HLA-DQA1*05:03の細胞表面発現量が最も高いことが確認された。内在性コントロールとしてGFPを発現可能なpcDNA3.1(+) IRES GFPプラスミドベクターを活用し、トランスフェクション効率を補正した場合も同様の結果であった。また、結合ペプチドが細胞表面発現量に与える影響を調べるため、既報でT細胞エピトープとして報告されているimmunodominant AQP4ペプチドとこれらのHEK293細胞の共培養を行ったが、いずれのペプチドにおいても細胞表面発現量におけるHLA-DQA1*05:03の優位性は保たれた。現在NMOSD患者のPBMC（Peripheral Blood Mononuclear Cells）を収集しており、HLA-DQA1*05:03陽性PBMCを用いた解析を進めることを検討している。