尿中遊離糖の腫瘍マーカー探索と臨床応用に向けた定量法の確立

探索尿游离糖肿瘤标志物并建立临床应用定量方法

• 批准号: 22K15700
• 负责人: 半澤 健
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15700/
• 关键词: 遊離糖鎖; 尿; がん; 腫瘍マーカー; 質量分析; LC/MS; HPLC; 高速液体クロマトグラフィー

以前に行った、がんにおける比較的小さな尿中遊離糖鎖の変化に関する研究に引き続いて、より大きな構造の糖鎖に着目した腫瘍マーカー候補の探索を進めた。これまでに、健常者においてごく微量あるいは検出限界以下のシアリル化された多分枝（3, 4本鎖）糖鎖が、がん患者において増加傾向を示すことを確認している。基本的な多分枝糖鎖に関しては、酵素・化学修飾処理により分枝とシアル酸の結合様式まで解析を進められている。一方、分枝に加えて末端部に伸長構造を有すると推定される糖鎖も検出されているが、現状は質量による組成のみが判明している。また、分析手法の改良に関する検討も行った。収率評価のための内部標準として添加するための糖鎖として、天然にはほぼ存在しないと考えられる単糖残基を部分構造として組み込み、かつ天然糖鎖と性質が類似した合成オリゴ糖を設計した。さらに、微量な糖鎖のLC/MS検出安定性を高めるための感度の向上実験も行った。結果として、水リッチな逆相HPLC/MS(/MS)において、元の流速と同程度の揮発性有機溶媒または元の流速の0.2～2%程度の揮発性弱酸をポストカラム添加することにより、カラムにおける糖鎖分離に影響を与えずにポジティブモードにおける糖鎖の感度を1.5～2.5倍程度増加させることができた。これによりスプレーの安定性も増したためMS/MS定量測定値の再現性も向上した。一方で、特にシアル酸残基を4つ以上有する糖鎖およびリン酸基を有する酸性糖鎖は、精製度を高めるための複数回のHPLC分離を行うと収率が大きく低下することを確認している。これらの糖鎖はHPLCのカラム・配管に金属イオン不純物を介して吸着しやすいとされ、これによりクロマトグラムのピーク形状が悪くなりやすく（感度が低い・キャリーオーバーしやすい）、したがって定量分析を進めていくうえで改善すべき課題と考えられた。

Line before に っ た, が ん に お け る compare small さ な urine free sugars locked の variations change に masato す る research に lead き 続 い て, よ り big き な tectonic の sugar に lock on mesh し た swollen sores マ ー カ ー alternate の explore を into め た. こ れ ま で に, health often に お い て ご く trace あ る い は 検 out under limit の シ ア リ ル change さ れ た many-branched this lock (3, 4) lock が sugar, が ん patients に お い て rights and tendency を shown す こ と を confirm し て い る. Basic な many-branched sugar lock に masato し て は, enzymes, chemical modified 処 に よ り branch と シ ア の ル acid combined with others in type ま で parsing を into め ら れ て い る. Side, branch に plus え て terminal part に elongation a す を construction る と presumption さ れ る sugar lock も 検 out さ れ て い る が, present situation quality に は よ る composition の み が.at し て い る. Youdaoplaceholder0, the analytical approach is related to the improvement of に and the する検 discussion of った. 収 rate review 価 の た め の internal standard と し て add す る た め の sugar lock と し て, natural に は ほ ぼ exist し な い と exam え ら れ る 単 sugar residues を partially constructed と し て group み 込 み, か つ natural sugar lock と similar nature が し た synthetic オ リ ゴ sugar を design し た. Youdaoplaceholder0, trace な sugar lock <s:1> LC/MS検 stability を high めるため <s:1> sensitivity <e:1> upward experiment った performance った. Results と し て, water リ ッ チ な reverse phase HPLC/MS/MS) に お い て, yuan の velocity と の wield the same extent 発 sexual organic solvent ま た は yuan の の swing velocity の 0.2 ~ 2% degree 発 sexual weak acid を ポ ス ト カ ラ ム add す る こ と に よ り, カ ラ ム に お け る sugar lock separation に influence を and え ず に ポ ジ テ ィ ブ モ ー ド に お け る sugar lock の The degree of を increases by 1.5 to 2.5 times that of させる とがで とがで た. <s:1> れによ スプレ スプレ れによ <s:1> <s:1> stability <s:1> increase たためMS/MS quantitative measurement value <s:1> reproducibility <e:1> upward <s:1> た. Party で, に シ ア ル acid residues を more than 4 つ す る sugar lock お よ び リ ン acid radical を have す る acid lock は sugar, high pure system を め る た め の plural back line の HPLC separation を う と が big き 収 rate low く す る こ と を confirm し て い る. こ れ ら の sugar lock は HPLC の カ ラ ム, piping に metal イ オ ン impurity content を interface し て sorption し や す い と さ れ, こ れ に よ り ク ロ マ ト グ ラ ム の ピ ー ク shape が 悪 く な り や す く (sensitivity, low が い キ ャ リ ー オ ー バ ー し や す い), し た が っ て quantitative analysis を into め て い く う え で improve す べ と き subject exam え ら れ た.

项目成果

尿中酸性遊離糖鎖とそのがん患者における変化の解析

癌症患者尿酸性游离糖链及其变化分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 半澤健;岡本三紀;村上博子;宮本泰豪
• 通讯作者: 宮本泰豪

尿中遊離糖鎖の検出と疾患マーカーとしての可能性

尿液中游离糖链的检测及其作为疾病标志物的潜力

• 发表时间: 2022
• 作者: 半澤健;岡本三紀;村上博子;中嶋和紀;宮本泰豪
• 通讯作者: 宮本泰豪

Sialylated free-glycans in urine and their alterations in cancer

尿液中的唾液酸化游离聚糖及其在癌症中的变化

• 发表时间: 2022
• 作者: Ken Hanzawa;Miki Tanaka-Okamoto;Hiroko Murakami;Yasuhide Miyamoto
• 通讯作者: Yasuhide Miyamoto