ADA2欠損症の血管炎病態の分子メカニズム解析

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共培養を用いた血管炎モデル系での発現解析を実施するに先立ち、無刺激状態でのU937細胞mock株及びADA2ノックアウト株を用いてmRNA発現解析を実施した。その結果、患者末梢血細胞でのmRNA・プロテオーム解析結果で得られた知見同様、ADA2ノックアウト株においてIFN-γ経路及びTNF-α経路の亢進が示唆された。現在有刺激での発現解析に加え、共培養系での発現解析を行うべくサンプリングを予定している。近位依存性ビオチン標識プロテオーム解析によるADA2相互作用分子の探索に関して、解析に際して必要となる、野生型に加え複数のADA2変異型のプラスミドを作製を完了した。さらに、HEK293細胞への強制発現でBioID法によるプロテオーム解析を実施したところ、変異株に共通して野生株に比較し明らかに発現低下している遺伝子・タンパクを複数確認した。レンチウイルスを用いてU937細胞への導入を完了し、次の段階として、作製したU937細胞を用い、無刺激並びに共培養系でのBioID法プロテオーム解析を予定している。共培養系を用いた化合物スクリーニングに関して、JAK経路を阻害する既存の化合物にまずは範囲を広げてスクリーニングを実施したところ、新たに細胞障害抑制効果が得られる化合物が認められた。JAK選択性に一定した傾向が認められていないことからその点も含めた考察を進めると共に、JAK経路阻害以外の化合物にもスクリーニング対象を拡大し実施する予定としている。