The mechanism of the host-microbe interaction through host- and bacteria-derived extracellular vesicles in the gastrointestinal diseases

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(1)腸内細菌由来のOMVs による宿主細胞の変化の検証各種腸内細菌を培養し、その培養上清よりOMVsを超遠心法を用いて単離した。Lactobacillus spp.より単離したOMVsを大腸癌細胞株に投与し、細胞増殖能の変化をSRB assayにて評価したところ、大腸癌細胞の増殖抑制が確認された。このことから、これまでに報告されているLactobacillus spp.の抗腫瘍作用のメカニズムの一つとして、Lactobacillus由来の分子XがOMVを介して癌細胞に運ばれ、腫瘍増殖抑制に作用していることが示唆された。そこで、これらの増殖抑制がどのように起こるかについてメカニズムを明らかにするため、アポトーシスの有無、細胞周期変化をwestern blotting、TUNEL 染色、フローサイトメトリーを用いて検証中である。また、OMVsに内包されていると考えられる核酸（RNA, small RNA, DNA）については抽出を行い、同定およびヒト由来核酸との比較を行っている。OMVsの産生量や内包されている物質は培養条件により異なるため、さらに最適な培養条件を検証中である。(2)宿主細胞由来のEVsによる細菌の機能および細菌叢の変化の検討正常大腸上皮細胞株（HCEC-1CT）、各種大腸癌細胞株の培養上清を細菌培養の培地に加え菌増殖能、短鎖脂肪酸(short chain fatty acid; SCFA)、 リポ多糖（Lipopolysaccharide; LPS）産生量の変化を計測するため、現在、各種細胞株の培養上清を細菌に加える際の最適な条件、炎症を惹起する条件を検証している。また、患者由来腸管上皮細胞EVs を細菌に投与するため、腸疾患患者の腸生検由来オルガノイドを作成し、オルガノイドからのEVsが充分に得られる条件を検討中である。