tRNA 修飾酵素CDKAL1による糸球体足細胞機能制御の分子メカニズム解明

阐明tRNA修饰酶CDKAL1调节肾小球足细胞功能的分子机制

• 批准号: 22K16224
• 负责人: 永芳 友
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16224/
• 关键词: RNA修飾病; CDKAL1; 糖尿病性腎症; 慢性腎不全; 足細胞

初年度は足細胞におけるCDKAL1の直接的な影響を評価するため培養足細胞を用いた検討を行った。具体的にはマウス由来腎臓足細胞(E11細胞)からCRISPR-Cas9システムを用いてCdkal1のノックアウトを行った。このノックアウト細胞から抽出したRNAでは、Cdkal1が修飾を付与するリジンtRNAのチオメチル化修飾が消失していた。その後、ノックアウト細胞株を用いてネフリンやポドシンを含む足細胞機能に重要なタンパク質を中心とした発現評価を、トランスクリプトーム解析およびプロテオーム解析の両解析を用いたオミックス解析で行った。その結果、各タンパクのリジン含有量が多いほど、ノックアウト細胞における発現量が低下することを明らかにした。またRNAの発現量には変化を認めなかった。Cdkal1ノックアウト細胞株の足細胞機能評価を行うためwound healing assayを行ったところ、ノックアウト細胞において有意に細胞移動速度が低下していた。次年度以降は、今回作成したCdkal1ノックアウト細胞に野生型のCdkal1を強制発現させる相補実験を行うことでこれらの表現型が改善するかを評価する。また全身型Cdkal1ノックアウトマウスを用いて5/6腎臓適出やシスプラチン投与による腎機能に変化を評価する。

The direct effects of CDKAL1 on podocytes in early years were evaluated. The specific gene is derived from renal podocytes (E11 cells) and is used in CRISPR-Cas9 system. This is the first time that a cell has been modified to extract RNA, Cdkal1, or RNA. The cell lines are used to analyze the changes in cell quality, including podocyte function. As a result, the content of each protein was increased, and the amount of protein in each protein was decreased. The RNA production level is low. Cdkal1: Podocyte Function Evaluation of Cell Lines: Wound Healing Assay, Wound Healing Assay, Wound Healing Assay In the following year, the phenotype of Cdkal1 was improved by decreasing and increasing the stress of Cdkal1 in wild-type cells. The whole body Cdkal1 can be used in 5/6 kidney function evaluation.