横紋筋融解症に伴う急性腎障害に対するメガリンASOの有用性の検討

巨蛋白 ASO 对横纹肌溶解相关急性肾损伤的有效性检查

• 批准号: 22K16244
• 负责人: 莖田 昌敬
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16244/
• 关键词: 横紋筋融解症; メガリン; ASO; 腎機能障害

本研究の目的は「横紋筋融解症を呈するマウスモデルを用いて、メガリンASO(アンチセンスオリゴヌクレオチド)の腎障害に対する有用性を検討すること」である。この目的を達成するために、①メガリンASOがどのような時間経過でメガリン蛋白質発現を抑制するか？②メガリンASOは横紋筋融解症に伴う急性腎障害に対し保護的に働くか？を明らかにすることを目的としてマウスを用いた動物実験を行っている。① メガリンASOは皮下への投与後、血液を介して各種細胞へと移行する。細胞内ではmRNAとハイブリダイズされ遺伝子発現を抑制した後、蛋白質合成を低下させる。一方で、近位尿細管の細胞膜上に発現しているメガリンはリガンドとの結合後、エンドソームとして一旦は細胞内に取り込まれるが、再度リガンドと離開し、一部は細胞膜上へとリサイクルされる。以上のことから、ASO投与後から蛋白質の発現が低下するまでの間、一定の時間が必要と推測されるが、生理的なメガリンの半減期は知られていない。そのため、まずはメガリンASO投与後の遺伝子(mRNA)、蛋白質の発現についてqPCR、免疫組織学的検査で経時的な量的変化を確認した。②メガリンASOは横紋筋融解症に伴う急性腎障害に対し保護的に働くかを検討するために、まずは50%グリセロールの両側下腿への筋肉注射により横紋筋融解症を誘導する、横紋筋融解症モデルマウスの確立を図った。グリセロール投与後の腎障害を経時的に評価することができた。

这项研究的目的是“探索Megalin ASO（反义寡核苷酸）对使用横纹肌溶解的小鼠模型对肾脏损伤的有用性”。为了实现这一目标，1）Megalin ASO抑制多长时间抑制Megalin蛋白表达？ 2）Megalin ASO是否可以防止与横纹肌溶解有关的急性肾脏损害？正在使用小鼠进行动物实验，以阐明以下内容。 1）皮下施用梅加林后，它通过血液转移到各种细胞。细胞内，它与mRNA杂交，抑制基因表达，然后降低蛋白质合成。另一方面，在近端小管的细胞膜上表达的梅加林首先在与配体结合后首先将其作为内体被吸收到细胞中，但再次与配体分离，一部分被回收到细胞膜上。基于上述内容，估计在给药后的时间之前，蛋白质表达降低，但梅加林的生理半衰期尚不清楚。因此，通过qPCR和梅加林ASO给药后的基因（mRNA）和蛋白表达的免疫组织学检查，随着时间的推移随时间变化。 2）研究Megalin ASO是否可以防止与横纹肌溶解相关的急性肾脏损伤，我们首先建立了一种模型小鼠，该模型通过肌内注射50％甘油在低腿中诱导横纹肌溶解。随着时间的推移，可以评估甘油给药后的肾脏损伤。