肝細胞癌におけるEB1とOATP1B3の分子病理学的関連性の解明

阐明EB1与OATP1B3在肝细胞癌中的分子病理关系

• 批准号: 22K16476
• 负责人: 相山 健
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16476/
• 关键词: 免疫染色; ノックアウト細胞株; 肝細胞癌; EB1; OATP1B3

臨床検体を用いた免疫染色(免染)は、ようやく倫理委員会の許可がおりたところである。現在数例の検体を用いてEB1とOATP1B3の免染の条件検討を行っている。免染のポジティブおよびネガティブコントロールとして細胞株のセルブロックを作製し条件検討に使用している。細胞実験については、現在保有している肝癌細胞株(PLC/PRF/5、HLE、HLF、HuH-7、JHH4、KIM-1、KYN-2、Li-7)のCt-OATP1B3(Cancer-type OATP1B3)のmRNAの発現量を確認した。対照としてはCt-OATP1B3の発現が報告されている結腸癌細胞株であるHCT-116を用いた。また、先行研究で作成したHuH-7のEB1-KO(Knock Out)株とこれらにLentivirus vectorを用いてEB1を過剰発現させた細胞株と対照としてEmpty Lentivirus vectorを使用した株をそれぞれ用いて、同様にCt-OATP1B3のmRNA発現量を解析した。大部分の肝癌細胞株でCt-OATP1B3の発現が認められ、KYN-2は特に高発現であった。HuH-7のEB1KO株、EB1Overexpression株の検討ではHuH-7でのCt-OATP1B3発現量と比較し、EB1KO株では発現量の減少を認め、逆にEB1Overexpression株では発現量の増加を認めた。また、上記肝癌細胞株のOATP1B3のタンパクの発現量も確認した。 これらの結果からOATP1B3の発現量が比較的高い肝癌細胞株を選択し、CRISPR-Cas9によるOATP1B3-KO株を現在作製中である。しかし、OATP1B3が増殖能の関わっている影響なのか、KO用のCRISPR-Cas9を導入した細胞株の生存率が悪く、作製に難渋している。

Clinical 検 body を is immunostained (unstained) by た た and approved by the ようやく ethics committee がお がお たと たと ろである ろである ろである. Now several examples of <s:1> 検 body を are used to を てEB1とOATP1B3 <s:1> non-staining <s:1> conditions 検 to negotiate を lines って る る る る る る る る る る る る る る る. Avoid dye の ポ ジ テ ィ ブ お よ び ネ ガ テ ィ ブ コ ン ト ロ ー ル と し て cell lines の セ ル ブ ロ ッ ク beg に 検 し conditions using the を cropping し て い る. Cell experiments に に に て て て and the current presence of <s:1> て る る る mRNA <e:1> in the remaining <s:1> て る る liver Cancer cell lines (PLC/PRF/5, HLE, HLF, HuH-7, JHH4, KIM-1, KYN-2, Li-7) <s:1> Ct-OATP1B3(cancer-type OATP1B3) を has been confirmed を た. The が report on the が report of the されて る る る る colon cancer cell line であるHCT-116を was conducted against と て て <s:1> Ct-OATP1B3. ま た, leading research で し た HuH - 7 の EB1 - KO (if you Out) strains と こ れ ら に Lentivirus vector を with い て EB1 を through turning 発 now さ せ た cell lines と polices according to と し て Empty Lentivirus vectorを was analyzed using the た た strain をそれぞれ with を て and the same にCt-OATP1B3 <s:1> mRNA occurrence amount を. Most of the liver cancer cell lines でCt-OATP1B3 have が recognition められ, and KYN-2 has <s:1> extremely に high presence であった. HuH - 7 の EB1KO seedlings の, EB1Overexpression beg で 検 は HuH - 7 で の Ct - OATP1B3 発 now と compare し, EB1KO strains で は 発 is の reduce を recognize め, inverse に EB1Overexpression strains で は 発 now quantity の raised を recognize め た. Youdaoplaceholder0, the above recorded liver cancer cell line <s:1> OATP1B3 タ パ パ <s:1> the occurrence quantity of た confirmed また た. The <s:1> れら れら results showed that the <s:1> らOATP1B3 line with a relatively high <s:1> hepatoma cell line occurrence が selected を the 択 による and CRISPR-Cas9による oatp1b3-ko lines を are currently under preparation である. し か し, OATP1B3 が rights can yield の masato わ っ て い る influence な の か, KO の CRISPR - Cas9 を import し た cell lines の survival が 悪 く, for making に 渋 し て い る.