Development of new therapeutic strategy for treatment-resistant colorectal cancer by CRISPR genome-wide analysis

通过 CRISPR 全基因组分析开发治疗难治性结直肠癌的新治疗策略

• 批准号: 22K16492
• 负责人: 鉾之原 健太郎
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16492/
• 关键词: CRISPR-Cas9; 大腸癌; CRISPR/Cas9; バイオインフォマティクス; バイオマーカー; 薬剤耐性

①CRISPR-Cas9を用いて一度に多くの遺伝子編集を行うためには、レンチウイルス由来のsgRNAライブラリを用いることが重要である(ゲノムワイド編集)。当教室ではこれまで遺伝子編集の実績がなく、まずはCRISPR-Cas9での遺伝子編集実験を導入するにあたって、癌細胞培養ができる環境を整備すると共に、レンチウイルスを用いた実験が行えるような実験室が必要であった。そのために、今回共同研究することとなった基礎教室と連携し、P2実験室の環境を整備した。②実際に遺伝子編集研究を導入する前に、ゲノム編集ハンズオントレーニングに参加した(Thermo Fisher SCIENTIFIC)。CRISPR-Cas9を用いた３つの実験系(Plasmid、RNA、Protein)を用いての遺伝子編集の方法と、ノックアウトする遺伝子を決定するsgRNAのデザイン方法を学んだ。その後、HEK293細胞に対して、Plasmidベクターを用いてHPRT1遺伝子をノックアウトさせることに成功した。また、GFP遺伝子を導入したHEK293細胞に対し、CRISPR-Cas9を用いて1塩基挿入(ノックイン)を惹き起こし、BFP遺伝子に変異させることに成功した。③2023年2月に遺伝子組換え新規実験申請の許可を得た。当教室で行う癌細胞を用いた遺伝子編集実験の導入として、レンチウイルスを使用してVEGFA遺伝子をノックアウトさせるカスタムsgRNAを現在作成中である。作成したsgRNAを用いて、当教室で所有する大腸癌細胞(HCT116等)のVEGFA遺伝子をノックアウトさせる予定である。

1CRISPR-Cas9 uses multiple sub-edits for multiple edits. This is the origin of the sgRNA editing set. When you are in the classroom, you need to know that you are in the classroom. When you are in the classroom, you need to know that you are not in the classroom. When you are in the classroom, you are in the classroom. When you are in the classroom, you are in the classroom. When you are in the classroom, you are required to do so. When you are in the classroom, you are in the classroom. You are not in the classroom. You are not required. This time, we will jointly study the training of the basic classroom and the environmental equipment of room P2. 2. International sub-editing set study. Before entering the Thermo Fisher SCIENTIFIC, the editing set will be ready to participate. CRISPR-Cas9 uses the method of editing the collection (Plasmid, RNA, Protein), and determines the method of learning by using the method of editing the collection. After that, the HEK293 cell won't let you know, and Plasmid won't let you know that you won't make it. You won't know if it was successful. You won't know if it was successful. GFP, BFP, and so on, respectively, in this case, you will find that you will not be able to do so. It is possible to apply for new regulations in February 32023. When the classroom uses the VEGFA subset to enter the computer, the sgRNA is now in the process of making. Make "sgRNA" to use, when the classroom "all" big cancer cells (HCT116, etc.), "VEGFA", "son", "make a decision", "predict"."