TIGITノックアウトヒトNK細胞を用いた膠芽腫に対する新規治療法の開発

利用 TIGIT 敲除人类 NK 细胞开发胶质母细胞瘤新治疗方法

• 批准号: 22K16667
• 负责人: 森本 尭之
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16667/
• 关键词: 膠芽腫; NK細胞; ゲノム編集; CRISPR/Cas9; TIGIT

本研究の目的は、チェックポイント受容体であるTIGITをノックアウトしたヒトNK細胞を誘導し、各種モデルを用いたGBMに対する抗腫瘍効果の増強を示し、臨床応用に寄与できる詳細な細胞特性を明らかにすることで、NK細胞を用いたGBMに対する新規免疫治療法の確立の土台を形成することである。2022年度には、TIGIT KO NK細胞を作成すべく、CRISPR/Cas9の配列を決定し、実際にin vitroにてゲノム編集NK細胞を確立する必要があった。IDT社のWebサイトにてsingle-guide RNA(sgRNA)を設計する。TIGIT遺伝子を切断する標的配列を設計し、細胞内の非相同末端結合を利用した修復を誘起する。遺伝子ノックアウト効率については設計したCRISPR配列によって違いが生じることを我々は経験しており、中には遺伝子をノックアウトできない領域も存在する可能性も想定される。このため少なくとも2つ以上の位置でCRISPR配列を設計するものとした。CRISPER配列として、3つを設定することができ、いずれも違ったexonに存在することを確認できた。これらのCRISPRを用いて、ヒト末梢血から誘導したNK細胞に対して電気穿孔法でCRISPR/Cas9を誘導し、TIGITを発現する遺伝子のノックアウトを行い、ゲノム編集後のNK細胞のTIGIT発現やその他のcheck point recepterの発現を確認することが目的です

The purpose of this study is to use TIGIT as a receptor The anti-tumor effect of various NK cells can be enhanced by inducing GBM of various kinds of モデルをIndicates clinical application and detailed information on cell characteristics and NK cell characteristics. The new regulation of immunotherapy using GBM is used to form a new immunotherapy method. In 2022, TIGIT KO NK cells are produced, CRISPR/Cas9 alignment is determined, and NK cells are compiled in vitro and established, and they are necessary. IDT's Web design single-guide RNA (sgRNA). TIGIT's legacy is to cut and design the array of targets, and to repair and induce the combination of non-identical ends in the cell.缝子ノックアウトefficiencyについてはdesignしたCRISPR arrangementによってviolationいが生じることを我々は経験しており, 中には缝子をノックアウトできない地も是什么意思是什么意思.このため小なくとも2つThe above position is the CRISPR arrangement を design するものとした. CRISPER arrangement として, 3つをsetting することができ, いずれもviolation ったexonにexistence することをconfirmation できた.これらのCRISPRをUsing いて, ヒトPeripheral bloodからInductionしたNK cellsに対してElectroporation methodでCRISPR/Cas9をInductionし、TIGITを発appearsする伝子のノックアウトを行い、ゲノムAfter compilationのNK cellsのTIGIT発appearsやそのhisのcheck point receptorの発appears to confirm the purpose of the point receptor