栄養膜細胞由来ナノ粒子に着目した新たな細胞外輸送機構の解明と妊娠高血圧腎症の予知

阐明一种新的细胞外转运机制，重点关注滋养层细胞衍生的纳米颗粒和先兆子痫的预测

• 批准号: 22K16843
• 负责人: 野口 隼矢
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16843/
• 关键词: 胎盤; 胎盤特異的mircroRNA; 細胞外ナノ粒子; 妊娠高血圧腎症; 栄養膜細胞; ナノ粒子; exomere

①栄養膜細胞の分化・増殖および異常に伴い分泌されるナノ粒子の包括的な発現解析と細胞間シグナル伝達機構の解明、②ナノ粒子の臨床応用のための基盤確立を目指し、妊娠高血圧腎症妊婦の発症および発症前血漿中のナノ粒子を解析し、新規予知因子の探索・同定を行うことを目的として研究を行った。①：胎盤栄養膜細胞株（BeWo細胞）から分泌される細胞外小胞および細胞外ナノ粒子を段階的超遠心分離法によって分離・精製し、透過型電子顕微鏡解析、Nano-tracking analysisによって構造解析を実施し、各マーカーを用いたウェスタンブロット解析を実施した。これによりBeWo細胞から細胞外ナノ粒子が多量に分泌されていることが明らかとなった。次に細胞外ナノ粒子におけるmicroRNAリアルタイムPCR解析を実施したところ、これまで細胞外小胞において豊富に含有されていると考えられていた胎盤特異的microRNA（C19MC）のいくつかは細胞外ナノ粒子により豊富に含有されていることが明らかとなった。またそれら細胞外ナノ粒子を分離した後、レシピエント細胞に対する取り込み解析を実施したところ、細胞外ナノ粒子由来C19MCがより多量にレシピエント細胞へと取り込まれ、標的mRNA発現を減少させることが明らかとなった。このことから細胞外ナノ粒子が胎盤特異的miRNAの機能的キャリア―である可能性が示唆された。現在、臨床サンプルから分離および初代培養を実施した栄養膜細胞を用いた解析を進めている。②：血液サンプル由来の細胞外ナノ粒子の分離・精製の条件検討および予備解析を実施した。正常妊婦およびPE発症妊婦血液サンプルの採取を進めるとともに、随時解析を実施できるよう準備を進めている。

(1) Analysis of the differentiation, proliferation and abnormal secretion of NP-containing particles and elucidation of intercellular mechanisms;(2) Establishment of a matrix for clinical use of NP-containing particles;(3) Analysis of NP-containing particles in plasma prior to the development of hypertensive nephropathy in pregnancy;(4) Exploration of new predictive factors;(5) Identification of NP-containing particles;(6) Research on NP-containing mechanisms;(7) Research on NP-containing particles in plasma prior to the development of hypertensive nephropathy in pregnancy.①: The placental trophoblast cell line (BeWo cells) secretes extracellular vesicles and extracellular nanoparticles. It is separated and refined by ultra-telecentric separation method, analyzed by transmission electron microscope, analyzed by Nano-tracking analysis, and analyzed by various methods. A large amount of extracellular particles are secreted from the cells. PCR analysis of the extracellular microRNA was performed, and the extracellular microRNA was enriched with placenta-specific microRNA (C19MC). The expression of target mRNA was reduced after isolation of extracellular particles, and the expression of target mRNA was reduced. The possibility that extracellular miRNA particles may function as placenta-specific miRNAs may be demonstrated. Now, clinical isolation and primary culture of cultured membrane cells can be used for analysis. 2: The separation and purification of extracellular particles from blood samples and the preparation of analysis are carried out. Normal pregnant women and PE pregnant women's blood supply to take, at any time analysis, implementation, preparation, progress

项目成果

胎盤栄養膜細胞株（BeWo）由来細胞外粒子の解析

胎盘滋养层细胞系 (BeWo) 细胞外颗粒的分析

• 发表时间: 2023
• 作者: Matsui H;Iriyama T;Sayama S;Inaoka N;Suzuki K;Yoshikawa M;Ichinose M;Sone K;Kumasawa K;Nagamatsu T;Fujisawa T;Naguro I;Ichijo H;Fujii T;Osuga Y.;野口 隼矢，斗澤 昇平，櫻井 孝信，高橋 宏典，大口 昭英，藤原 寛行，瀧澤 俊広
• 通讯作者: 野口 隼矢，斗澤 昇平，櫻井 孝信，高橋 宏典，大口 昭英，藤原 寛行，瀧澤 俊広

栄養膜細胞から分泌されるナノ粒子の同定：BeWo 細胞を用いた解析

滋养层细胞分泌的纳米颗粒的鉴定：使用 BeWo 细胞进行分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 斗澤昇平;野口隼矢;櫻井孝信;高橋宏典;大口昭英;藤原寛行;瀧澤俊広
• 通讯作者: 瀧澤俊広

酵素組織化学, 免疫組織化学, in situ hybridization：生殖器研究における組織化学

酶组织化学、免疫组织化学、原位杂交：生殖器官研究中的组织化学

• 发表时间: 2022
• 作者: 瀧澤俊広;野口隼矢;小管拓治;WangJunxiao;櫻井孝信;瀧澤敬美;羅善順
• 通讯作者: 羅善順

前立腺癌細胞から分泌されるナノ粒子の同定と特徴付け：PC-3 細胞を用いた解析

前列腺癌细胞分泌的纳米颗粒的鉴定和表征：使用 PC-3 细胞进行分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 吉村 拓馬;山上 亘;中村 康平;高橋 美央;平野 卓朗;坂井 健良;真壁 健;千代田 達幸;小林 佑介;阪埜 浩司;西原 広史;青木 大輔;熊澤惠一;野口 隼矢，櫻井 孝信，近藤 幸尋，瀧澤 俊広
• 通讯作者: 野口 隼矢，櫻井 孝信，近藤 幸尋，瀧澤 俊広

マウス胎盤特異的長鎖ノンコーディングRNA 1600012P17Rikは近傍遺伝子Pappa2の発現に影響を与える

小鼠胎盘特异性长非编码RNA 1600012P17Rik影响附近基因Pappa2的表达

• 发表时间: 2022
• 作者: Omori Hirofumi;Nishio Miki;Masuda Muneyuki;Miyachi Yosuke;Ueda Fumihito;Nakano Takafumi;Sato Kuniaki;Mimori Koshi;Taguchi Kenichi;Hikasa Hiroki;Nishina Hiroshi;Tashiro Hironori;Kiyono Tohru;Mak Tak Wah;Nakao Kazuwa;Nakagawa Takashi;Maehama Tomohiko;Suzuki;野口 隼矢，Wang Junxiao，羅 善順，瀧澤 俊広
• 通讯作者: 野口 隼矢，Wang Junxiao，羅 善順，瀧澤 俊広