シスプラチンによる感音難聴に対するインスリン様細胞成長因子1の効果

胰岛素样细胞生长因子1对顺铂所致感音神经性听力损失的影响

基本信息

批准号：
22K16928
负责人：
山原康平
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16928/
关键词：
シスプラチン内耳インスリン様細胞成長因子1

项目摘要

本実験系における適切なCDDP濃度と投与時間を決定するため、幼齢マウスの感覚上皮を摘出し、様々な濃度および投与時間のCDDP投与を行った後染色しそれぞれの群の蝸牛基底回転の外有毛細胞数を計測したところ、濃度10 uMのCDDPを36時間投与した群で約50%の外有毛細胞傷害を起こすことが分かり、以後の実験でこの傷害モデルを使用した。IGF1のCDDPによる有毛細胞傷害への効果を見るため、CDDPのみを投与した群、CDDPとIGF1を同時投与した群の計3群に分け培養を行ったところ、IGF1とCDDPを同時投与した群はCDDP単独投与した群に比較して統計学的有意に生存有毛細胞数が多い結果であった。投与したIGF1による外有毛細胞保護効果が、有毛細胞上のIGF1受容体への結合によって発揮されたものかを調べるために、IGF1受容体の競合的阻害薬（JB1）を用いた実験を行った。CDDPのみを投与した群、CDDPとIGF1を同時投与した群、CDDPとIGF1とJB1を同時投与した群の3群に分けたところ、JB1を使用した群でIGF1の保護効果が減弱されることが確認された。有毛細胞数を保つためには「細胞死の抑制」と「細胞増殖」の2つの機序が重要であるが、IGF1のCDDPからの外有毛細胞保護効果がいずれの機序から成立しているのか調べるために、それぞれアポトーシスマーカーであるcleaved caspase-3染色と細胞増殖マーカーであるBrdU染色を使った実験を行ったところ、IGF1とCDDP同時投与群はCDDP単独投与群と比較して、cleaved caspase-3陽性細胞は統計学的有意に少ない結果であったが、BrdU陽性細胞に関しては両群で有意差は認めなかった。以上の結果から、IGF1はその受容体を介し、主に抗アポトーシス効果を持つことでCDDPから外有毛細胞を保護することが分かった。

为了确定该实验系统中适当的CDDP浓度和给药时间，除去了年轻小鼠的感觉上皮，并以各种浓度和给药时间给予CDDP，并进行染色，并测量每组中线毛基底旋转中的外毛细胞数量。发现大约50％的外毛细胞损伤是在该组以10 um浓度为10 um的组造成的36小时，随后的实验中使用了这种损伤模型。为了了解IGF1对毛细胞损伤的影响，我们将IGF1对毛细胞损伤的影响进行了分配，并且该组单独管理CDDP，并且该组同时施用CDDP和IGF1，并且该组给予IGF1和CDDP的组具有统计上可行的毛细胞的统计学上明显高于组的毛细胞数量。为了研究是否通过与毛细胞上的IGF1受体结合来施加施用IGF1的外毛细胞的保护作用，我们使用IGF1受体的竞争性抑制剂（JB1）进行了一项实验。当分为三组时：单独施用CDDP的组，共同管理CDDP和IGF1的组，以及由CDDP，IGF1和JB1共同管理的组，确认在使用JB1的组中降低了IGF1的保护作用。为了维持毛细胞的数量，两种机制，“细胞死亡抑制”和“细胞增殖”很重要。为了研究IGF1保护外毛细胞免受CDDP的影响，我们使用凋亡标记裂解caspase-3染色和细胞增殖标记BRDU染色进行了实验。在共同管理IGF1和CDDP共同管理的组中，裂解的caspase-3阳性细胞的数量在统计学上显着少于单独使用CDDP处理的组，但两组在BRDU阳性细胞上没有显着差异。从上述结果中，发现IGF1通过其受体保护外毛细胞免受CDDP的影响，主要是通过具有抗凋亡作用来保护。