乳歯歯髄幹細胞培養上清・エクソソームの骨誘導機序の解明と口蓋裂骨再生治療への応用

阐明乳牙牙髓干细胞培养上清和外泌体的骨诱导机制及其在腭裂骨再生治疗中的应用

• 批准号: 22K17229
• 负责人: 平木 智香
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K17229/
• 关键词: SHED; エクソソーム; 培養上清; 間葉系幹細胞; 骨再生; 口蓋裂

本研究では、乳歯歯髄由来間葉系幹細胞培養上清（SHED-CM）に含まれる骨再生に有用な液性因子および細胞外の小胞エクソソーム (SHED-EXs)を解明するとともに、SHED-CM を応用した新規の顎裂部骨再生治療法の確立を目指すことを目的とする。これまでに、SHED-CMが骨欠損部の骨再生能を有していることを解明し、SHED-CMに含まれるタンパク質の定量解析を行なった。2022年度には、ヒト由来血管内皮細胞株 (HUVEC)、マウス頭蓋冠由来骨芽細胞株 (MC3T3-E1)、ヒト骨髄由来間葉系幹細胞（hBMSCs）を用いた。各細胞を培養し、SHED-CMを添加し、細胞増殖能、骨代謝因子および血管新生マーカーの発現について検証を重ねた。各細胞にSHED-CMを添加して培養し、細胞増殖能について検証を行なった結果、SHED-CM群で有意に細胞増殖が認められた。hBMSCs にSHED-CMを添加した結果、VEGF、Ang１、Ang2、HGF、ALP、Runx2、OCNの遺伝子発現は有意に亢進された。MC3T3-E1においても同様に、ALP、Runx2、OCNの遺伝子発現に有意な亢進が認められた。また、SHED-CMに含まれるタンパク質の定量解析の結果解明された液性因子について、抗中和抗体を添加し、細胞増殖能および骨形成能を検証することで、SHED-CM中の骨再生に有効な上清成分の液性因子について検証を行なった。さらに、これらの研究結果について論文の投稿を行なった。

In this study, the mesenchymal stem cell culture supernatant (SHED-CM) derived from lactation and lactation was found to be useful for bone regeneration. (SHED-EXs) するとともに, SHED-CM を応用した新码のestablishment of cleft bone regeneration treatment method すことをpurpose とする.これまでに、SHED-CMがbone defective partのbone regeneration energyを有していることを解明し、SHED-CMにまれるタンパクqualityのquantitative analysisを行なった. In 2022, the vascular endothelial cell line (HUVEC) derived from HUVEC, the bone bud cell line (MC3T3-E1) derived from HUVEC, and the mesenchymal stem cells (hBMSCs) derived from HUVEC are used. The culture of each cell, the addition of SHED-CM, the cell proliferation ability, and the angiogenesis of bone metabolism factors are all confirmed. Each cell has been cultured with the addition of SHED-CM, the cell proliferation ability has been verified, and the results of the SHED-CM group's intended cell proliferation have been verified. The results of hBMSCs added to SHED-CM, VEGF, Ang1, Ang2, HGF, ALP, Runx2, and OCN were increased. MC3T3-E1においても同様に,ALP,Runx2,OCNの伝子発appearsに有purposeな Hyperactivityがcognizeめられた.また, SHED-CM contains まれるタンパクquality のquantitative analysis results clarification されたliquid factor について, anti-neutralizing antibody をadded し, cell growth The bone formation ability and bone formation ability of SHED-CM are effective in bone regeneration and the supernatant component of SHED-CM is a liquid factor.さらに、これらのResearch resultsについてThesis submissionを行なった.