权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

DNAプローブ固定化カラムによる特定DNA断片の高分解能検出分離法の開発

使用DNA探针固定柱开发特定DNA片段的高分辨率检测和分离方法

基本信息

批准号：
62880028
负责人：
和田昭允
金额：
$ 2.05万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至 1988
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、核酸相補鎖の相互作用が極めて高い選択特異性を持つことを利用し、簡便かつ高い信頼性のもとに効率よく特定の塩基配列を単離したり、特定の塩基配列の存在や変異を検出したりするシステムを開発することである。この方法の原理は、DNAプローブを固相化しプローブとサンプルとの相互作用が塩基組成に依存せず、単にプローブとサンプル間の類似性の強弱のみに依存する条件(2.4M TEACl)を用い、温度を精密にコントロールすることでサンプルの液相と固相の間の分布を調整することにより、目的とする核酸塩基配列を含む断片を効率よく単離、精製、分析を行うというものである。本年度は以下に述べるように、現在の分子生物学等に於けるクローニングの技術の重要性に鑑み、効率のよいクローニング法の開発を行った。1.比較的簡便な、HPLCゲルへのプローブの固定化法の開発;リクロスフェアーSi1000に、非水性環境下でエポキシ基を導入、酸で水解してジオール基とし、非水性環境下にトレシルを導入した。プローブ側は、5'端にアミノリンクを付加した。両者を混合、反応させ、プローブをゲルに末端固定した。2.サンプルDNAと固相化プローブのハイブリッド形成;RIでラベルしたサンプルDNAを用い、ハイブリッド形成に影響を与える種々の因子の影響を調べ、特定の遺伝子を単離するための適切な条件を定めた。3.RNAと固相化プローブとのハイブリッド形成;この手法が特定のRNAの単離に使えるかどうかを調べた。極めて有望な結果を得た。4.ヒトのゲノミック遺伝子、5'端制御領域の単離、クローニング;実際に、ヒトのエンブリオナル・カルチノーマ(EC)細胞(2×10^6ケ)から抽出されたDNAより、フィブロネクチン遺伝子5'端制御領域を極めて効率的に単離、クローニングした。本研究で得られた結果の関連分野への影響は、多大なものと思われる。

In this study, the purpose of this study is that the interaction between nucleic acid phase and nucleic acid phase is very important. The purpose of this study is to select the specific strategy, nucleic acid phase and nucleic acid phase interaction. in this study, the purpose of this study is to select the purpose of this study, the interaction between nucleic acid phase and nucleic acid phase is very important in this study. in this study, the purpose and the interaction between nucleic acid phase and nucleic acid phase are very important. The principles of the method, the principle of the DNA method, the composition of the base of the interaction mechanism, the strong and weak dependence conditions (2.4m TEACl), the temperature measurement, the liquid phase interphase distribution, the temperature measurement, the temperature, the liquid phase, the solid phase, the liquid phase, the solid phase, the temperature, the Objective to determine whether the nucleic acid base contains fragments and the rate of isolation, precision, and analysis. This year, we will discuss the following information, such as molecular biology, etc., in order to evaluate the importance of technology, and to evaluate the importance of technology. 1. The method of immobilization is available for comparison, HPLC, and the immobilization method is available. It can be used in non-aqueous environment, in non-aqueous environment, in acid-hydrolyzed environment, in non-aqueous environment, and in non-aqueous environment. Please pay me a lot of money and pay more money at the 5' end. The others are mixed, reversed, and fixed at the end. two。 The effect of the solid phase of the DNA on the formation of the system; the RI test on the use of the DNA, the effect on the impact of a variety of factors, and the effect of specific factors on the performance of the system. The formation of 3.RNA solid-phase particles is due to the formation of specific RNA devices. It is expected that the results will be successful. 4. The 5 'end is responsible for the control of the field, and the 5' end is responsible for the control of the field. The cell (EC) cell (2 × 10 ^ 6) is used to extract the data from the DNA, the 5 'end is to control the field, and the 5' end is to control the field. The results of this study show that there is a significant difference between the results of this study.