FプラズミドSopB蛋白質を核とする多要素DNA蛋白質複合体の構造生物学

F-プラズミドが宿主大腸菌細胞の分裂に際し1個づつ分配されつ機構を分子生物物理学的に理解するために、この分配機能の中心的役割を果しているSopB蛋白質を核とした多要素DNA-蛋白質複合体における構造と機能の相関を明らかにするのが、本研究の目的である。1. SopB蛋白質と相互作用する大腸菌構造の同定SopB蛋白質が内膜分画にあることを初めて明らかにした。可溶化によって、SopB蛋白質に相互作用する蛋白質を検索したところ,33kDaと140kDaのものを見出した。2. SopB蛋白質の構造と機能SopB蛋白質を多量に発現しても、結合サイトsopC近傍の遺伝子が抑制の起こらない変異体を12種単離した。変異はC末側2/3に集中していた。さらに、この中から、細胞内での局在の起こらないものを見出した。3. SopB蛋白質DNAの複合体の結晶化N末端側の欠くSopB蛋白質とDNA2重鎖21マーとの複合体の結晶化に成功した。4. SopA蛋白質とSopB蛋白質の相互作用SopA蛋白質は大量発現されるとそれ自体で染色体DNAを凝集させる作用があることを見出した。SopAのN末側がDNA結合に関与することと、SopAがSopBのC末側ドメインに結合することを見出した。5. DNAの高次構造SopB蛋白質の結合によるDNAのトポロジーの変化の理解のため、DNAのトポロジーと粘着末端構造のと関係を明らかにした。

F-プラズミドが宿主大腸菌細胞の分裂に際し1個づつ分配されつ機構を分子生物物理学的に理解するために、この分配機能の中心的役割を果しているSopB蛋白質を核とした多要素DNA-蛋白質複合体における構造と機能の相関を明らかにするのが、本研究の目的である。1. SopB蛋白質と相互作用する大腸菌構造の同定SopB蛋白質が内膜分画にあることを初めて明らかにした。可溶化によって、SopB蛋白質に相互作用する蛋白質を検索したところ,33kDaと140kDaのものを見出した。2. SopB蛋白質の構造と機能SopB蛋白質を多量に発現しても、結合サイトsopC近傍の遺伝子が抑制の起こらない変異体を12種単離した。変異はC末側2/3に集中していた。さらに、この中から、細胞内での局在の起こらないものを見出した。3. SopB蛋白質DNAの複合体の結晶化N末端側の欠くSopB蛋白質とDNA2重鎖21マーとの複合体の結晶化に成功した。4. SopA蛋白質とSopB蛋白質の相互作用SopA蛋白質は大量発現されるとそれ自体で染色体DNAを凝集させる作用があることを見出した。SopAのN末側がDNA結合に関与することと、SopAがSopBのC末側ドメインに結合することを見出した。5. DNAの高次構造SopB蛋白質の結合によるDNAのトポロジーの変化の理解のため、DNAのトポロジーと粘着末端構造のと関係を明らかにした。