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膜電位依存性K^+チャネル(KV3.1)に会合する調節蛋白のcDNAクローニング

与膜电压门控 K^+ 通道 (KV3.1) 相关的调节蛋白的 cDNA 克隆

基本信息

批准号：
09780720
负责人：
横山茂
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780720/
关键词：
膜電位依存性カリウムチャネル Kv3.1 Kv1.2 カリウムチャネル cDNAクローニング

项目摘要

1. カリウム(K+)チャネル(Kv3.la)のアミノ(N)末端、カルボキシ(C)末端、および第1膜貫通領域と第2膜貫通領域を連結する細胞外ループの3か所のアミノ酸配列にもとずく合成ペプチドに対する抗体を作製した。これに加えて、Kv1.2チャネルのアミノ(N)末端に対する抗体も作製した。2. Kv3.1aのalternative splicing variantであるKv3.1bをマウス小脳からクローン化した。Kv3.1bはC末端細胞内領域のみKv3.1aと異なる。3. Kv3.1bをGFP(Green fluorescent protein)標識し、Kv3.laと同時に培養神経細胞株に発現させた。Kv3.1aを認識する抗体、およびKv3.1bに付加したGFPを異なる蛍光波長で検出したところ両者の細胞内分布に差異がみられた。Kv3.1aはより微細な神経突起にまで広く分布するのに対して、Kv3.1bの局在は細胞体近傍に限られる傾向があった。4. 以上より、Kv3.1aおよびKv3.1bのチャネル蛋白は異なるアンカー(anchor)蛋白に会合している可能性が示唆される。今後Kv3.1aおよびKv3.1bのC末端領域を餌(bait)にしてtwo-hybridシステムのcDNAライブラリーをスクリーニングする予定である。5. 上記1の抗Kv1.2抗体を用いてラット感覚神経節の免疫染色を行ったところ、中型から大型の細胞体に強い染色が観察された。Kv1.2チャネルは触覚等の特定の感覚の伝達に大きく関与することが示唆された。

1. The antibody is produced by the extracellular domain of the extracellular domain linked to the first membrane penetration domain and the second membrane penetration domain by the activation (N) terminal, activation (C) terminal, activation (K+) terminal, activation (K + terminal, activation (K +) terminal, activation (K +) terminal, activation (K + terminal, activation (K +) terminal, activation (K + terminal) terminal, The antibody was detected at the (N) terminus of the Kv1.2 gene. 2. Kv3.1a and alternative splicing variant Kv3.1b Kv3.1b C-terminal intracellular domain Kv3.1a. 3. Kv3.1b, GFP(Green fluorescent protein) marker, Kv3.1a and development of cultured neuronal cell lines. Kv3.1a and Kv3.1b are recognized as antibodies, and the intracellular distribution of GFP is different at different wavelengths. Kv3.1a has a tendency to distribute microneurites, while Kv3.1b has a tendency to limit the distribution of microneurites near cell bodies. 4. The above, Kv3.1a and Kv3.1b proteins are different from each other. The C-terminal domain baits of Kv3.1a and Kv3.1b are now scheduled to be used in the two-hybrid system. 5. The anti-Kv1. 2 antibodies described above were detected by immunostaining of middle, middle and large cell bodies. Kv1.2: A message from a particular person, such as a contact person, can be sent to the user.