免疫カセットセオリーに基づくハンタウイルス核蛋白高度保存領域での感染防御免疫誘導

基于免疫盒理论利用汉坦病毒核蛋白高度保守区诱导感染保护性免疫

• 批准号: 09780775
• 负责人: 森松 組子
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780775/
• 关键词: ハンタウイルス; ワクチン; 感染モデル; マウス; HFRS; 核蛋白; ペプチドワクチン; 抗原提示; 主要組織適合抗原

ハンタウイルスは腎症候性出血熱の原因ウイルスで、ブニヤウイルス科に属するRNAウイルスである。この研究ではハンタウイルス内部蛋白の特定のエピトープを標的抗原とする新しいタイプのペプチドワクチンの開発を目的として、マウス実験感染モデルを用いて単クローン抗体E5/G6エピトープペプチドの誘導する免疫応答とその感染防御活性について検討している。平成10年度は、カセット配列(主要組織適合抗原結合領域)を付加した,E5/G6エピトープのペプチド抗原による免疫応答の解析を明らかにするために、ペプチドを合成しマウスに免疫し免疫応答を測定することを試みた。1. ペプチドデザインPeptide 1 YEGF-EDVNGIRKP-KAKGITPeptide 2 YEGFS-EDVNGIR---KAKGITをMAP及び通常のペプチドとして合成した。これはH-2bのカセット配列に、E5G6エピトープ配列EDVNGIRKPKを挿入したものである。2. 免疫MAPのペプチド抗原を100ug/mouse complete adjuvantとともにC57BL6マウスに免疫し、経時的に採血し、抗体価の上昇を調べた。3. T細胞応答の測定系の確立牌臓細胞をX線照射によって不活化し、抗原提示細胞として用いることを試みた。昨年度の研究結果から非RI測定系を確立するため代替法として、市販のテトラゾリウム塩類、酵素を比較した結果、WST-1が他の試薬と比べて比較的安定した結果が得られることがわかっている。今年度はWST-1法でT細胞応答測定するための条件設定として、照射線量、細胞数を検討し、ほぼ決定することができた。4. ペプチドに対する抗体応答MAP peptideを免疫したマウスから経時的に採血し、ハンタウイルス感染細胞を抗原とする間接蛍光抗体法で血中抗体を測定した。免疫後2カ月たっても明らかな抗体価の上昇は認められなかった。免疫カセットセオリーに基づいて免疫した場合、誘導される免疫は直接にはヘルパーT細胞である。この免疫法において抗体が上昇する例が報告されているものの、そのメカニズムは明らかではない。今回の2種の免疫ではおそらくT細胞は誘導できたと予想されるが、抗体を誘導することはできなかった。以上の経過から古典的な抗体を誘導するペプチドワクチンとしての応用は難しいことが示された。

汉坦病毒是导致肾脏症状出血热的病毒，是属于Buniaviridae家族的RNA病毒。这项研究旨在开发一种新型的肽疫苗，该肽疫苗将汉坦病毒内部蛋白质的特定表位作为抗原，并检查使用小鼠实验感染模型的单克隆抗体E5/G6表位肽及其感染保护活性引起的免疫反应。在1998年，我们试图合成肽并免疫小鼠以测量免疫反应，以阐明对具有盒式磁带序列（主要的组织兼容性抗原结合区域）的E5/G6表位的肽抗原的分析。 1。肽设计肽1 YEGF- edvngirkp-kakgitp肽2 YEGFS-EDVNGIR --- Kakgit合成为MAP和常规肽。这是E5G6表位序列EDVNGIRKPK插入H-2B的盒式磁带序列。 2。C57BL6小鼠用100ug/小鼠完全调节的免疫成肽抗原免疫，并随着时间的推移收集血液以检查抗体滴度的增加。 3。建立用于测量T细胞反应的系统，我们试图通过X射线照射使细胞细胞失活，并将其用作抗原呈递细胞。去年的研究结果表明，与其他试剂相比，WST-1的结果相对稳定，作为建立非RI测量系统的替代方法。今年，我们能够大致确定使用WST-1方法测量T细胞反应的细胞的辐射剂量和数量。 4。随着时间的推移收集对用肽免疫的肽图小鼠的抗体反应，并使用汉塔病毒感染的细胞作为抗原，使用间接荧光抗体法测量血液抗体。即使在免疫后2个月后，也没有观察到抗体滴度的明显增加。当基于免疫盒理论免疫时，诱导的免疫力是直接的辅助T细胞。尽管已经报道了这种免疫方法中升高的抗体病例，但这种机制的机制尚不清楚。预计过去的两种免疫接种可能会导致T细胞，但不能诱导抗体。上述过程表明，很难将其用作诱导经典抗体的肽疫苗。