電子メディエーター機能を持たせた修飾補酵素による酵素センサーシステムの構築

利用具有电子介体功能的修饰辅酶构建酶传感器系统

• 批准号: 10750572
• 负责人: 木島 龍朗
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10750572/
• 关键词: 補酵素; NAD^+; メディエーター; フェロセン; サイクリックボルタンメトリー; 酵素センサー; 修飾

【1】フェロセン修飾補酵素の合成補酵素NAD^+へ電子メディエーター部分としてのフェロセニルアミン誘導体をアミド結合を介して分子導入することに成功した.合成方法としては,まず補酵素NAD^+と無水コハク酸とから,アデニン環の6-NH_2位へコハク酸を結合させ,Succinyl-NAD^+を合成し,末端をカルボン酸として得た.次にフェロセンのアミン(2-アミノエチルフェロセン)を反応条件の温和なDCC法を用いてSuccinyl-NAD^+にアミド結合でフェロセンを導入した.【2】フェロセン修飾補酵素の活性評価フェロセン修飾NAD^+,ADH(アルコールデヒドロゲナーゼ)を用いたエタノールの酸化反応を行い,UV-VISスペクトルでNADHの生成を見た.その結果,340nmにNADHの特性吸収が見られ,補酵素が修飾後も機能を保持していることを確認した.さらに同反応系にシクロヘキサノンを加えて,還元反応とのカップリングを行い,適時GCにてサンプリングを行い,Linweaver-bulkプロットにより反応初速度を求めた.その結果,修飾補酵素は0.16(μmol/min・mg)で,native NAD^+:0.23(μmol/min・mg)に比ベ,若干の反応初速度の低下が認められた.これは修飾後の立体障害が原因と考えられる.【3】電気化学的特性の評価電気化学分析システム(CS-1090A:東亜電波工業)を用いて,ADH,フェロセン修飾NAD^+,エタノールによる酵素センサーモデル系を作成し,その電気化学的特性をサイクリックボルタンメトリーにより調べた.その結果,基質のエタノール存在下で,酸化電流値の増幅が見られた.またメディエーターとNAD^+をそれぞれフリーで使用する従来のセンサー系に比べて2倍以上速い応答性を示した.今後,さらに他の酵素への展開を進める予定.

[1] the synthetic enzyme NAD^ + was successfully inserted into the complex complex by combining the molecular weight of the enzyme. The synthesis method is simple, the enzyme nad ^ + anhydrous sulfonic acid, the ambient temperature 6-NH_2, the combination of sulfonic acid, Succinyl- nad ^ + anhydrous acid, and the end-to-end synthesis. In the second part of this paper, we use the mild DCC method to modify the Succinyl- conditions. [2] to modify the enzyme activity, to modify the activity of enzymes, to modify the nad ^ +, and to use the ADH method to acidify the anti-drug. UV-VIS has generated a lot of money from NADH. The results showed that the absorption of nadh at 340 nm was not found. After the enzyme was modified, the machine was able to maintain the temperature response. In the same way, you need to make sure that you are not responsible for the increase, and that the GC is responsible for the speed change, while the Linweaver-bulk is responsible for determining the initial speed. The results showed that the enzyme activity was 0.16 (μ mol/ min mg), native nad ^ + was 0.23 (μ mol/ min mg), and the initial velocity of several antigens was low. After the repair, the cause of the stereoscopic barrier has been investigated. [3] the characteristics of electrochemistry. The chemical analysis of electrical equipment (CS-1090A) is used in the chemical analysis of electrical equipment. (ADH, electrical engineering) is used to repair NAD^ +, and the properties of electrochemistry are made. According to the results of the experiment, there is a significant difference between the two groups, and the amplitude of the acidizing effect is different. This is more than twice the speed and responsiveness of the system. In the future, the development of other enzymes will be scheduled.