カイコ変態期の細胞死におけるpolyA^+RNA結合蛋白質ホモローグの機能解析

PolyA^+RNA结合蛋白同源物在家蚕变态过程细胞死亡中的功能分析

• 批准号: 10760033
• 负责人: 小谷 英治
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10760033/
• 关键词: polyA^+RNA結合蛋白質; 細胞死; 変態; 中腸; 絹糸腺; カイコ

カイコ消化管において、ほ乳類で発見されたアポトーシス誘導性polyA^+RNA結合蛋白質であるTIA-1との相同蛋白質(TIA-1ホモローグ)のメッセンジヤーRNAが存在することを見い出してきた。カイコの中腸・絹糸線組織において、mRNAおよび蛋白質が幼虫一蛹変態期に強く発現することから、このTlA-1ホモローグは変態に伴う細胞死過程に役割を持つことが示唆された。そこでこの蛋白質の細胞死との関連を明らかにするため、カイコ培養細胞にTIA-lホモローグを導入し、誘導される細胞内変化を追跡した。(1)大腸菌発現系を用いて構築したTIA-1ホモローグ蛋白質は確かにRNA結合活性を有しており、これをトランスフェクション法によりBm-N4細胞に取り込ませた。ターミナルデオキシヌクレオチディルトランスフェラーゼを用いてDNAの断片化を起こした細胞を特異染色したところ、TIA-1ホモローグ蛋白質を取り込んだ実験区には、対照として牛血清アルブミンを取り込ませた対照区には見られない死細胞の増加が処理後4時間までに観察された。(2)またTIA-1ホモローグの全長cDNAとその上流にメタロチオネインプロモーターを連結した配列を挿入した組換えプラスミドを作製し、これをBm-N4細胞に取り込ませた。硫酸銅添加によりTIA-1ホモ口一グの誘導を行ったところ、プロモーターを含まないプラスミドを用いて処理した細胞には見られない死細胞の増加が処理後9時間までに確認された。以上の結果から、カイコTIA-1ホモローグは培養細胞の細胞死過程を誘導する機能を持つことが明らかとなった。またこのpolyA^+RNA蛋白質が変態期における組織の細胞死を誘導する可能性も考えられる。

In the digestive tract and breast cancer, we can see that there is a negative effect on the growth of the digestive tract and milk. The combination of polyA ^ + RNA and protein TIA-1 has the same protein (TIA-1 protein). There is a negative effect on RNA. In the middle of the disease, the tissue tissue, the mRNA protein, the larvae, the larvae and the larvae. This is the first step in the process of cell death. In this way, we will know that the cells are TIA-l, and that they are responsible for intracellular activation. The main results were as follows: (1) the binding activity of TIA-1 was confirmed by the use of protein in Bm-N4 cells to determine the binding activity of RNA. The cell cultures were stained with the fragments of DNA, and the cells were stained with TIA-1. The samples were collected from the culture zone, and the samples were collected from the control area after treatment. 4 hours after treatment, the samples were monitored. (2) the full-length cDNA information system should be assigned to the system to make full use of the data in the system, and the Bm-N4 cell would be able to access the data. Sulfuric acid is added as soon as the TIA-1 is added. It is necessary to make sure that it is valid for 9 hours after the operation is completed. The results of the above results show that the process of cell death is a key step in the process of cell death, and the mechanism is able to maintain the process of cell death. The expression of polyA ^ + RNA protein is related to the possibility of cell death in the tissue.

项目成果

Kotani E.: "Cloning and sequence of a cDNA for a highly basic protease from the digestive juice of the silkworm,Bombyxmori" Insect Molecular Biology. 8. 1-6 (1999)

Kotani E.：“来自蚕消化液的高碱性蛋白酶的 cDNA 的克隆和序列，Bombyxmori”昆虫分子生物学。

Kotani E.: "Cloning and sequence of a cDNA for a highly basic protease from the digestive juice of the silkworm, Bombyx mori"Insect Molecular Biology. 8. 1-6 (1999)

Kotani E.：“来自蚕（Bombyx mori）消化液的高碱性蛋白酶的 cDNA 的克隆和序列”昆虫分子生物学。