チミジンキナーゼの新しいタイプの変異とアシクロビル耐性単純ヘルペスウイルス

胸苷激酶的新型突变与耐阿昔洛韦单纯疱疹病毒

• 批准号: 10770378
• 负责人: 西條 政幸
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770378/
• 关键词: 単純ヘルペスウイルス; チミジン燐酸化酵素; アシクロビル; 耐性; チミジンリン酸化酵素; アシクロピール

1)アシクロビル(ACV)感受性単純ヘルペスウイルス(HSV-1 TAS)からのACV耐性HSV-1の作製:ACV濃度を徐々に高めた培地でHSV-1 TASを培養し,ACV耐性HSV-1を24株作製した.2)ACV耐性HSV-1のチミジンリン酸化酵素(TK)遺伝子の塩基配列:24株のACV耐性HSV-1のうち,8株の遺伝子は430-436番目のGが7塩基続く部位にGが1塩基挿入され,Gが8塩基続く変異を起こしていた.2株は548-553番目のCが6連続する塩基配列のうち,1塩基のCが欠損する変異を起こしていた.また,2株は1071-1074番目に位置する4連続したCから1塩基のCが欠損する変異を起こしていた.このように24株のうち,12株はGまたはCが連続する塩基配列に,塩基の挿入または欠損という変異を伴っていた.その他の12株においては,8株がさまざまな部位に1アミノ酸変異をもつTK蛋白を,3株が1塩基置換による早期ストップコドン出現による短いTK蛋白を,1株が連続する塩基配列の欠損による短いTK蛋白を発現した.3)TK活性とACVリン酸化酵素活性の測定:24株のACV耐性HSV-1のうち,2株がTK活性を親株とほぼ同等に発現するTK変異株で,残りの22株はTK欠損株であった.2株のTK変異株はともに1アミノ酸変異をもつTK蛋白を発現していた.4)結論:ACV耐性HSV-1のほぼ半分は,TK遺伝子における連続するGあるいはCの部位に1塩基の欠損・挿入によるACV耐性を獲得し,30%はTK蛋白のアミノ酸変異によるACV耐性を獲得する.また,1アミノ酸変異によるACV耐性株8株のうち,4株はATP-binding siteやnucleotide-binding site以外の部位のアミノ酸変異を有していた.つまり,それら以外の部位におけるアミノ酸変異もTK活性やACVリン酸化活性に影響をあたえる.

1）从Acyclovir（ACV）敏感疱疹病毒（HSV-1 TAS）中制备ACV抗ACV的HSV-1：在培养基中培养ACV浓度升高的培养基中的HSV-1：在培养ACV浓度升高的培养基中以产生24种ACV抗ACV抗ACV的HSV-1.2菌株，是胸腺素磷酸化的24 cv-1 acv-1 acv-nseant acv-nseant knseant kentimant acv-1耐ACV的HSV-1，8菌株将一个碱基插入位点，其中G为7个碱基，然后将G在8个碱基中突变。这两种菌株连续六个C连续6个C连续C，548-553。其中，一个碱基有一个突变，其中C缺失了。此外，两个菌株具有一个突变，其中1071-1074位的连续CS缺失C。因此，在24个菌株中，有12个在基本序列中具有突变，其中g或c连续，碱插入或缺陷。在其他12种菌株中，各个部位有8种菌株有一个氨基酸突变。三种菌株由于一种基本替代而导致的早期停止密码子出现，表达短的TK蛋白，并且由于连续碱基序列的缺乏而表达短的TK蛋白。3）测量TK活性和ACV磷酸酶活性的测量：ACV抗ACV抗HSV的24个菌株的TK菌株是TK突变的24个菌株，而TK突变是TK的22含量，而tk的含量几乎表达了tk的含量，而tk含量是平等的。 TK突变体的两个菌株是TK突变体。 4）结论：几乎一半的ACV耐药性HSV-1在TK基因中连续的G或C位点上的一种基本缺失和插入而获得了ACV抗性，而30％的ACV由于TK蛋白的氨基酸突变而实现了ACV耐药性。此外，在由一个氨基酸突变引起的八种ACV抗性菌株中，四个菌株具有ATP结合。它在部位和核苷酸结合部位以外的其他位点具有氨基酸突变。换句话说，其他部位的氨基酸突变也影响了TK活性和ACV磷酸化活性。

项目成果

Masayuki Saijo et al.: "Nucleotide sequence of thymidime kinase gene of sequential acyclovir-resistant herpes simplex virus type 1 recovered from a child with WAS."Journal of Medical Virology. 58. 387-393 (1999)

Masayuki Saijo 等人：“从患有 WAS 的儿童身上发现的连续阿昔洛韦耐药的 1 型单纯疱疹病毒的胸苷激酶基因的核苷酸序列。”医学病毒学杂志。