肺腺癌の悪性化に関わるECT2の検討

1. 研究目的本研究では、ECT2の細胞質への発現と悪性化との関連性について検討した。2. 研究方法(1)2000年から2010年までに筑波大学附属病院で外科的に手術された66例について、ホルマリン固定パラフィン包埋ブロックを用いて免疫染色を行った。(2)上記期間の症例のうち、新鮮凍結検体がある4例に対して、RNAシークエンスを行い、ECT2遺伝子の遺伝子変異の有無を調べた。(3)肺腺癌細胞株を用いて、核と細胞質を分離し、それぞれから蛋白を抽出した。ECT2高発現細胞株を同定しECT2との結合タンパクや下流の経路の活性化の状態についてCo-immunoprecipitation(Co-IP)を用いて検討した。3. 研究成果(1)ECT2の細胞質への発現は、N因子、pStage、v因子、1y因子、組織亜型、喫煙歴と関連を認め、5年生存率とも相関した。(2)肺腺癌症例4例に対して、ECT2の全exon領域に対してシークエンス解析を行ったが、遺伝子変異は検出されなかった。(3)(2)において、遺伝子変異が検出されなかったため、肺腺癌細胞株を用いて核と細胞質におけるECT2の発現を確認した。Calu-3、A549、RERF-LC-KJにおいて細胞質におけるECT2の高発現を確認した。さらに、Co-IPを用いて、細胞質におけるECT2とPKCiとの結合を確認した。また、ECT2の下流シグナルであるErk1, 2やMek1, 2を活性化していることがわかった。

1. 研究目的本研究では、ECT2の細胞質への発現と悪性化との関連性について検討した。2. 研究方法(1)2000年から2010年までに筑波大学附属病院で外科的に手術された66例について、ホルマリン固定パラフィン包埋ブロックを用いて免疫染色を行った。(2)上記期間の症例のうち、新鮮凍結検体がある4例に対して、RNAシークエンスを行い、ECT2遺伝子の遺伝子変異の有無を調べた。(3)肺腺癌細胞株を用いて、核と細胞質を分離し、それぞれから蛋白を抽出した。ECT2高発現細胞株を同定しECT2との結合タンパクや下流の経路の活性化の状態についてCo-immunoprecipitation(Co-IP)を用いて検討した。3. 研究成果(1)ECT2の細胞質への発現は、N因子、pStage、v因子、1y因子、組織亜型、喫煙歴と関連を認め、5年生存率とも相関した。(2)肺腺癌症例4例に対して、ECT2の全exon領域に対してシークエンス解析を行ったが、遺伝子変異は検出されなかった。(3)(2)において、遺伝子変異が検出されなかったため、肺腺癌細胞株を用いて核と細胞質におけるECT2の発現を確認した。Calu-3、A549、RERF-LC-KJにおいて細胞質におけるECT2の高発現を確認した。さらに、Co-IPを用いて、細胞質におけるECT2とPKCiとの結合を確認した。また、ECT2の下流シグナルであるErk1, 2やMek1, 2を活性化していることがわかった。