高度低分子化DNAを含有する法科学的試料からのABO遺伝子型判定法の開発

开发含有高度低分子量 DNA 的法医样本 ABO 基因分型方法

• 批准号: 19927021
• 负责人: 土井 裕輔
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: 岡山県警察本部科学捜査研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19927021/
• 关键词: ABO式血液型; 1塩基多型(SNPs); 犯罪捜査

本研究では、高度低分子化DNAを含有する法科学的試料からでも血液型判定が可能な検査法の開発を目的として、1塩基プライマー伸長反応を用いたABO遺伝子型検査法におけるPCRプライマーの改良並びに新しいプライマーを用いた本法の有用性を検証した。ABO遺伝子のPCR増幅は、新しく設計した2組のプライマーセットを用いて、exon6の塩基番号261、297を含む領域(89bp)及びexon7の塩基番号796、803を含む領域(58bp)をduplex PCRにより増幅した。この増幅産物を鋳型として、SNaPshot Multiplex kit(Applied Biosystems)を用いた1塩基プライマー伸長反応を行い、ABO遺伝子における4カ所のSNPs(塩基番号261、297、796、803)を同時に検出することによりABO遺伝子型を判定した。本法により、日本人30名の末梢血抽出DNAからいずれも正しく型判定され、検出限界はゲノムDNA50pgまで向上した。本法の種特異性の検討では、14種類の動物及び細菌のうち、チンパンジーとゴリラでのみ型判定されたが、それ以外ではヒトに相当するピークは検出されなかった。UV照射分解DNA試料を用いた実験では、増幅サイズが156bpと296bpであった以前のPCRプライマーでは400mJ/cm^2の照射で全てのピークが検出されなくなったのに対し、新しいプライマーでは800mJ/cm^2の照射でも型判定が可能であり、PCRプライマーを改良した本法の証拠物件鑑定における有用性が確認された。

In this study, it is possible to determine the blood type by using highly low-molecular-weight DNA as a sample containing a scientific method. Elongation reaction using the ABO legacy sub-type test method PCR test The effectiveness of this method has been proved by the improvement and improvement of the new method. ABO legacy PCR amplification, new design 2 groups of のプライマーセットを use いて, exon6 の塩塩号261, 297をcontaining domain (89bp) and びexon7の塩base number 796, 803をcontaining domain (58bp)をduplex PCR is amplified. SNaPshot Multiplex kit (Applied Biosystems) use the SNP of the いた1塩プライマーstretch reaction を行い, ABO 伝子における4カso s (base number 261, 297, 796, 803) に検出することによりABO 伝子TYPE をdeterminationした. This method is used to extract DNA from the peripheral blood of 30 Japanese people and determine the positive type of DNA. This method is used for species-specific tests, 14 species of animals and bacteria, and tests for 14 species of animals and bacteria. The ラでのみ type is judged by the されたが and the それではヒトに is equivalent to the するピークは検出されなかった. UV irradiation decomposes the DNA sample using 156bp and 296bpた前のPCRプライマーでは400mJ/cm^2のirradiationで全てのピークが検出されなIt is possible to determine the type of くなったのに対し and new しいプライマーでは800mJ/cm^2であり, PCR プライマーを Improvement した This method の 拠 object identification に お け る usefulness が confirmation さ れ た.