高度低分子化DNAを含有する法科学的試料からのABO遺伝子型判定法の開発

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本研究では、高度低分子化DNAを含有する法科学的試料からでも血液型判定が可能な検査法の開発を目的として、1塩基プライマー伸長反応を用いたABO遺伝子型検査法におけるPCRプライマーの改良並びに新しいプライマーを用いた本法の有用性を検証した。ABO遺伝子のPCR増幅は、新しく設計した2組のプライマーセットを用いて、exon6の塩基番号261、297を含む領域(89bp)及びexon7の塩基番号796、803を含む領域(58bp)をduplex PCRにより増幅した。この増幅産物を鋳型として、SNaPshot Multiplex kit(Applied Biosystems)を用いた1塩基プライマー伸長反応を行い、ABO遺伝子における4カ所のSNPs(塩基番号261、297、796、803)を同時に検出することによりABO遺伝子型を判定した。本法により、日本人30名の末梢血抽出DNAからいずれも正しく型判定され、検出限界はゲノムDNA50pgまで向上した。本法の種特異性の検討では、14種類の動物及び細菌のうち、チンパンジーとゴリラでのみ型判定されたが、それ以外ではヒトに相当するピークは検出されなかった。UV照射分解DNA試料を用いた実験では、増幅サイズが156bpと296bpであった以前のPCRプライマーでは400mJ/cm^2の照射で全てのピークが検出されなくなったのに対し、新しいプライマーでは800mJ/cm^2の照射でも型判定が可能であり、PCRプライマーを改良した本法の証拠物件鑑定における有用性が確認された。