ニホングリ品種「銀寄」におけるDNA変異の蓄積と果樹DNA教育実験の開発

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研究目的:大阪府北部域において江戸時代から栽培されてきたニホングリ品種「銀寄」について、地域に集積したDNAの変異を明らかにすることにより、古い栽培品種のDNA鑑定技術の信頼性について検証する。またニホングリを地域の在来栽培作物の遺伝資源としての重要性について科学的データをもって農業科専門教材としての位置づけを検討する。研究方法:大阪府北部の1市2町の点在するクリ園から、品種「銀寄」として栽培し、果実を出荷している5農家、1機関からニホンクリ30株の葉の提供を受け、いくつかの手法でDNA抽出を行った。また併せて2つの公的機関保有の「銀寄」株および日本で流通している主要なニホングリ品種についても葉の提供を受け、DNA抽出を行った。DNA分析は、DNAフィンガープリンティング法の中からAFLP分析を2組のセレクティブプライマーセットで実施した。なお、「銀寄」の対照として作出されて20年しか経過していないクリ新品種「ポロタン」数についても、AFLP分析を実施した。またニホングリ品種識別用SSRマーカも各「銀寄」サンプルおよび主要-ニホングリ品種に適用し、分析を試みた。研究成果:AFLP分析の結果、いずれのセレクティブプライマーセットも「銀寄」内に広くDNAバンドの多型が認められるとともに、株間のDNAバンドの類似度は系統関係の存在を示唆するものであった。SSR分析の結果において、収集した「銀寄」生産株のうち1つから「銀寄」や他の主要なニホングリのものとは異なる特異的な増幅バンドが検出された。しかし、この株の収穫期や果実を調査したところ「銀寄」の特徴を備えない小型、早生であり、当該のSSRマーカの品種識別能力が確かめられた。なお「ぽろたん」についてもAFLP分析におけるDNAバンド多型は認められた。なお、一連の実験経過から高等学校農業科果樹DNA実験教材としてDNA抽出に関しては現行教科書では取り上げられていないスピンカラムを用いる手法が優れていることが確かめられた。