ソラフェニブ服用患者の遺伝子多型が副作用発現に及ぼす影響

基因多态性对服用索拉非尼患者不良反应发生的影响

• 批准号: 23927003
• 负责人: 作山 佳奈子
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23927003/
• 关键词: ソラフェニブ; 副作用; CYP3A

研究目的本研究では、ソラフェニブ服用患者を対象に、薬物代謝酵素(CYP3A)の遺伝子多型がソラフェニブの副作用発現に与える影響を評価することを目的とした。日本人で頻度の高いCYP3A5^*3多型の検出系は、すでに確立しているため、先ず、次に頻度の高いCYP3A4^*16多型の簡便な検出法の確立から研究を開始した。研究方法PcR-RFLP法を用いたCYP3A4^*16簡便な検出法の確立血液1.0μL、2×PCR Buffer for KOD FX 10.0μL、2.0mM dNTP 4.0μL、フォワードプライマーCYP3A4F(5'-GATGATGGTCACACATATCTTC-3')及びリバースプライマーCYP3A4R(5'-GTCTGTCTTGACTGGACATGTGG-3')を各1.0μL及びKOD-FX polymerase 0.4μLを混合し、全量20.0μLとなるように反応液を調製した。反応条件としては、94℃を2分間処理後、98℃で10秒間、62℃で30秒間、68℃で15秒間のサイクルを35サイクル、最後に68℃で7分間処理した。次に、得られたPCR産物5.0μL、Xsp 10.5μL、K Buffer 1.0μL、滅菌精製水3.5μLを混合し、37℃で1時間処理した。制限酵素処理産物は3%アガロースゲルにて135Vで15分間電気泳動した。CYP3A4^*16ではXsp Iにより1ヶ所切断され、260bp及び133bpの断片の生成を確認することで遺伝子型を判定した。研究成果日本人30検体を用いて、CYP3A4^*16遺伝子多型解析を行った。その結果、1検体においてCYP3A4^*16のヘテロタイプが検出された。本実験におけるCYP3A4^*16の頻度は0.0167であった。現在、ソラフェニブ服用患者の血液を収集しており、今後CYP3A遺伝子多型がソラフェニブの副作用発現に及ぼす影響を評価する予定である。

Objective: To evaluate the side effects and effects of CYP3A gene polymorphism in patients treated with CYP3A. The study on the identification of CYP3A5^*3 polytype with high frequency in Japanese and the establishment of simple detection method for CYP3A4^*16 polytype with high frequency in Japanese. Study Methods CYP3A4^*16 was established by PcR-RFLP method. Blood 1.0μL, 2×PCR Buffer for KOD FX 10.0μ L, 2.0 mM dNTP 4.0μL, CYP3A4F 1.0μL of (5'-GATGATGGTCACATATCTTC-3') and 1.0μL of CYP3A 4R (5'-GTCTGTGACTGGACATGTGG-3') and 0.4μL of KOD-FX polymerase were mixed and the total amount of 20.0μL was prepared. The reaction conditions are: 94℃ for 2 minutes, 98℃ for 10 seconds, 62℃ for 30 seconds, 68℃ for 15 seconds, and finally 68℃ for 7 minutes. Next, PCR product 5.0μL, Xsp 10.5μL, K Buffer 1.0μL, sterile purified water 3.5μL were mixed and treated at 37℃ for 1 time. Control enzyme treatment product is 3% off, 135V, 15 minutes off. CYP3A4^*16 was identified as a fragment of Xsp I, 260bp and 133bp. Research Results Japanese 30-cell DNA, CYP3A4^*16 DNA Polytype Analysis The results of this study were as follows: 1. CYP3A4^*16. The frequency of CYP3A4^*16 is 0.0167. Now, the blood collection of patients taking CYP3A is expected to be determined, and the development and impact of CYP3A gene polymorphisms will be evaluated.