ソラフェニブ服用患者の遺伝子多型が副作用発現に及ぼす影響

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研究目的本研究では、ソラフェニブ服用患者を対象に、薬物代謝酵素(CYP3A)の遺伝子多型がソラフェニブの副作用発現に与える影響を評価することを目的とした。日本人で頻度の高いCYP3A5^*3多型の検出系は、すでに確立しているため、先ず、次に頻度の高いCYP3A4^*16多型の簡便な検出法の確立から研究を開始した。研究方法PcR-RFLP法を用いたCYP3A4^*16簡便な検出法の確立血液1.0μL、2×PCR Buffer for KOD FX 10.0μL、2.0mM dNTP 4.0μL、フォワードプライマーCYP3A4F(5'-GATGATGGTCACACATATCTTC-3')及びリバースプライマーCYP3A4R(5'-GTCTGTCTTGACTGGACATGTGG-3')を各1.0μL及びKOD-FX polymerase 0.4μLを混合し、全量20.0μLとなるように反応液を調製した。反応条件としては、94℃を2分間処理後、98℃で10秒間、62℃で30秒間、68℃で15秒間のサイクルを35サイクル、最後に68℃で7分間処理した。次に、得られたPCR産物5.0μL、Xsp 10.5μL、K Buffer 1.0μL、滅菌精製水3.5μLを混合し、37℃で1時間処理した。制限酵素処理産物は3%アガロースゲルにて135Vで15分間電気泳動した。CYP3A4^*16ではXsp Iにより1ヶ所切断され、260bp及び133bpの断片の生成を確認することで遺伝子型を判定した。研究成果日本人30検体を用いて、CYP3A4^*16遺伝子多型解析を行った。その結果、1検体においてCYP3A4^*16のヘテロタイプが検出された。本実験におけるCYP3A4^*16の頻度は0.0167であった。現在、ソラフェニブ服用患者の血液を収集しており、今後CYP3A遺伝子多型がソラフェニブの副作用発現に及ぼす影響を評価する予定である。