Korrelatives Kryo-Konfokalfluoreszenzmikroskop

本研究将采用一种具有Kryo-Einheit（cryo-Einheit）（cryo-Einheit）的激光扫描显微镜（LSM）进行显微镜下玻璃化观察，在零下196°C下观察生物材料，并通过Kryo-EM和Kryo-ET（Kryo-Transmissionselektronen）进行显微镜下图像和结构测量。Die auf EM-Netzehen（grids）bereits vitrifizierten，in flüssigem Stickstoff befindlichen Proben sollen in die Kryo-Einheit eingeführt，bei 77K konfokal，mit maximaler Auflösung（hoher numerischer mountur），Einzelmolekülfluoreszenzempfindlichkeit，guter spektraler puriminierung，vollständig（durch Montage阿勒Sichtbereiche），unter Erfasung der Netzehen-Topographie，aber auch in ausreichend Detail，nötigenfalls über Stunden mikroskopiert und zurück in den flüssigen Stickstoff verbracht韦尔登，ohne dass Devitrifizierung or der Dronkontamination eintritt.该软件的主要功能是在Kryo-EM（Software SerialEM）中建立兴趣点（POi），并通过Merkmalen（landmarks）的相关性和协调性来确定POi在超分辨率图像中的位置。最终解决了一个35 nm误差韦尔登的校准和EM图像。Hauptanwendung is die Aufklärung grundlegender Fragen des intrazellulären Transports am Beispiel des dynamischen COPII-Vesikelbildungsprozesses.提高韦尔登水解的作用，降低Vesikelabschnürung的机理和对Cargo-Proteinen的吸收。

Beantragt wird ein aufrechtes konfokales Laser-Scanning-Fluoreszenzmikroskop (LSM) mit einer Kryo-Einheit (cryo­stage) zur konfokalmikroskopischen Untersuchung vitrifizierter weicher, vorwiegend biologischer Materie bei minus 196°C und korrelierter Bildgebung und Strukturaufklärung derselben Proben mit Kryo-Transmissionselektronen­mikroskopie (Kryo-EM) und Kryo-Transmissionselektronentomographie (Kryo-ET). Die auf EM-Netzehen (grids) bereits vitrifizierten, in flüssigem Stickstoff befindlichen Proben sollen in die Kryo-Einheit eingeführt, bei 77K konfokal, mit maximaler Auflösung (hoher numerischer Apertur), Einzelmolekülfluoreszenzempfindlichkeit, guter spektraler Diskriminierung, vollständig (durch Montage aller Sichtbereiche), unter Erfassung der Netzehen-Topographie, aber auch in ausreichend Detail, nötigenfalls über Stunden mikroskopiert und zurück in den flüssigen Stickstoff verbracht werden, ohne dass Devitrifizierung oder Eiskontamination eintritt. Der Ablauf soll das Aufsuchen der interessanten Stellen (POi), das Wiederfinden der POi im Übersichtsbild im Kryo-EM (mit der Software SerialEM) mittels Korrelation von Merkmalen (landmarks) und Zuordnung der Koordinaten erlauben. Final soll eine Korrelationspräzision zwischen Fluoreszenz-und EM-Bild von 35 nm erreicht werden. Hauptanwendung ist die Aufklärung grundlegender Fragen des intrazellulären Transports am Beispiel des dynamischen COPII-Vesikelbildungsprozesses. Aufgeklärt werden sollen die Rolle der GTP-Hydrolyse, der Mechanismus der Vesikelabschnürung und die Auswirkungen von Cargo-Proteinen.