魚類加工品製造現場における簡便・迅速な魚種判別法の開発およびマニュアル化

【目的】原材料魚種や産地の表示が、JAS法で義務づけられているが、食品の表示を巡る偽装は後を絶たない。フグ類などの中には有毒成分が含まれる魚種もあり、迅速・簡便な種判別法の開発が重要である。また、食品製造業者や販売業者間では、製造過程や製品の原材料魚種判別技術の開発が求められている。そこで、DNAマクロアレイ分析をもとに食品製造現場で可能な原材料魚種判別法の開発を試みた。【方法】フグ類標品としてサバフグ属4種、トラフグ属8種およびヨリトフグを用いた。カワハギ類標品としては、カワハギ、ウマヅラハギおよびウスバハギを用いた。筋肉から抽出したDNAを鋳理に、ミトコンドリアcytochrome b遺伝子およびD-loopの一部領域を対象に5種類のプライマーを作成した。プライマーセットdot_15022-F/dot_16075-Rを用いてPCR増幅したDNA断片をメンブレン上にブロットしてアレイを作成した.プライマーセットdot_15619-F/dot_16069-Rを用いた領域についてはdigoxigeninで標識して種特異的プローブを作成し、DNAアレイ上でハイブリダイゼーションを行った。フグ類およびカワハギ類加工品についても同様の分析を行って原材料魚種を調べた。【結果】サバフグ属4種、ヨリトフグ、カワハギ類3種については、DNAアレイ分析の結果、すべての魚種を特異的に検出することができた。トラフグ属については、種特異的に検出された魚種もあったが、複数種との交差反応が見られた魚種もあった。フグ類およびカワハギ類を原材料とする加工品について同様に分析を行ったところ、いくつかの加工品で複数種と弱い交差反応を示したが、商品に表示されていた原料魚種をほぼ表示通り検出することができた。一連のDNAマクロアレイ分析中、DNA抽出キットやTOYOBO PerfectHybなどの試薬を用いて、分析にかかる時間の短縮を可能にした。しかしながら、原材料魚種判別には最低でもPCR装置や画像検出設備が必要であり、食品製造現場での種判別には課題が残された。

【目的】原材料魚種や産地の表示が、JAS法で義務づけられているが、食品の表示を巡る偽装は後を絶たない。フグ類などの中には有毒成分が含まれる魚種もあり、迅速・簡便な種判別法の開発が重要である。また、食品製造業者や販売業者間では、製造過程や製品の原材料魚種判別技術の開発が求められている。そこで、DNAマクロアレイ分析をもとに食品製造現場で可能な原材料魚種判別法の開発を試みた。【方法】フグ類標品としてサバフグ属4種、トラフグ属8種およびヨリトフグを用いた。カワハギ類標品としては、カワハギ、ウマヅラハギおよびウスバハギを用いた。筋肉から抽出したDNAを鋳理に、ミトコンドリアcytochrome b遺伝子およびD-loopの一部領域を対象に5種類のプライマーを作成した。プライマーセットdot_15022-F/dot_16075-Rを用いてPCR増幅したDNA断片をメンブレン上にブロットしてアレイを作成した.プライマーセットdot_15619-F/dot_16069-Rを用いた領域についてはdigoxigeninで標識して種特異的プローブを作成し、DNAアレイ上でハイブリダイゼーションを行った。フグ類およびカワハギ類加工品についても同様の分析を行って原材料魚種を調べた。【結果】サバフグ属4種、ヨリトフグ、カワハギ類3種については、DNAアレイ分析の結果、すべての魚種を特異的に検出することができた。トラフグ属については、種特異的に検出された魚種もあったが、複数種との交差反応が見られた魚種もあった。フグ類およびカワハギ類を原材料とする加工品について同様に分析を行ったところ、いくつかの加工品で複数種と弱い交差反応を示したが、商品に表示されていた原料魚種をほぼ表示通り検出することができた。一連のDNAマクロアレイ分析中、DNA抽出キットやTOYOBO PerfectHybなどの試薬を用いて、分析にかかる時間の短縮を可能にした。しかしながら、原材料魚種判別には最低でもPCR装置や画像検出設備が必要であり、食品製造現場での種判別には課題が残された。