層特異マーカーを用いたマウス大脳皮脂発生アトラス作成とweb上でのオンライン公開

研究の目的:我々の研究室ではreelin変異マウス(リーラー)やdab-1変異マウス(ヨタリ)など大脳皮質の層構築異常を示すミュータントマウスを用いて大脳皮質の層形成機構を多角的に解析している。これらの研究をサポートするため、マウス脳連続切片に各種層特異マーカーを用いた免疫染色を施し、大脳皮質におけるニューロンの発現パターンを経時的にまとめたものをデータベース化しweb上にて公開することにより、多くの学生および研究者のための資料を作る事を目的とした。研究方法・成果1まず始めに生後3週齢の正常およびホモ変異動物を用いて大脳皮質層特異マーカーであるCux2(II/III,IV層)、Ctip2(V,VI層)、Foxp2(VI層)、Brn2(II/III,V層)を用いて免疫染色をABC-DAB法にて行った。なおシグナル増強を目的として浮遊切片に10mMクエン酸緩衝液(PH6.0)中でマイクロウェーブ500W・2分間の賦活化処理を行ったことにより鮮明な染色結果が得られた。得られたデーターを顕微鏡CCDカメラにてデジタル撮影し、ファイルメーカーVer. 12(FileMaker Go)に取り込み、マウスの遺伝子型や染色に用いた抗体名・希釈倍率・各部位の名称・所見等の情報を入力の上、それらをデータベース化した。順次各胎生期および各日齢における標本を作成中である。またその他の層特異マーカーを用いた標本作成に加え、クリューバー・バレラ染色等の一般染色標本、BrdU(誕生日標識)注入時の増殖分裂期ニューロンを標識する免疫染色等も取り込み、データベースのさらなる充実を図りたいと考えている。

研究の目的:我々の研究室ではreelin変異マウス(リーラー)やdab-1変異マウス(ヨタリ)など大脳皮質の層構築異常を示すミュータントマウスを用いて大脳皮質の層形成機構を多角的に解析している。これらの研究をサポートするため、マウス脳連続切片に各種層特異マーカーを用いた免疫染色を施し、大脳皮質におけるニューロンの発現パターンを経時的にまとめたものをデータベース化しweb上にて公開することにより、多くの学生および研究者のための資料を作る事を目的とした。研究方法・成果1まず始めに生後3週齢の正常およびホモ変異動物を用いて大脳皮質層特異マーカーであるCux2(II/III,IV層)、Ctip2(V,VI層)、Foxp2(VI層)、Brn2(II/III,V層)を用いて免疫染色をABC-DAB法にて行った。なおシグナル増強を目的として浮遊切片に10mMクエン酸緩衝液(PH6.0)中でマイクロウェーブ500W・2分間の賦活化処理を行ったことにより鮮明な染色結果が得られた。得られたデーターを顕微鏡CCDカメラにてデジタル撮影し、ファイルメーカーVer. 12(FileMaker Go)に取り込み、マウスの遺伝子型や染色に用いた抗体名・希釈倍率・各部位の名称・所見等の情報を入力の上、それらをデータベース化した。順次各胎生期および各日齢における標本を作成中である。またその他の層特異マーカーを用いた標本作成に加え、クリューバー・バレラ染色等の一般染色標本、BrdU(誕生日標識)注入時の増殖分裂期ニューロンを標識する免疫染色等も取り込み、データベースのさらなる充実を図りたいと考えている。