ヒト脂肪由来細胞のシュワン細胞分化誘導培養の確立

人脂肪源细胞雪旺细胞分化诱导培养物的建立

• 批准号: 24930031
• 负责人: 近藤 貴子
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24930031/
• 关键词: 脂肪由来細胞; シュワン細胞; 細胞培養

【研究目的】本研究は新規の神経再生治療の確立のため、ヒト脂肪由来細胞よりシュワン細胞様細胞に分化させる培養法を構築することを目的とする。脂肪由来細胞を神経堤細胞そしてシュワン細胞に分化誘導させる2段階誘導法の構築を目指した。【研究方法】脂肪由来細胞を無血清凝集浮遊(SFEBq)培養法で7日間培養する際に、神経堤細胞分化誘導因子を添加し、神経堤細胞様の細胞凝集塊を形成した(1段階)。その後、Fibronectinコートした培養皿に細胞凝集塊を播種し、シュワン細胞分化誘導因子を添加し、7日間培養した(2段階)。1段階と2段階のRNAを回収し、細胞に発現する未分化細胞(SSEA1)、神経板(Sox2, Msx1)、神経管(Pax6)、表皮(GATA2)、神経堤(CD271, AP2, Snail2)およびシュワン細胞(Sox10, GFAP, Krox20)マーカーをRT-PCRにより解析した。【研究成果】使用したヒト脂肪由来細胞は皮下脂肪吸引物から単離された細胞である。細胞表面抗原はCD13,29,44,73,90,105,106陽性、CD14,31,45陰性で脂肪、軟骨、骨芽細胞へ分化することが確認されている。誘導前の細胞には、SSEA1が発現し、その他のマーカーは確認されなかった。1段階における神経堤細胞分化誘導因子(BMP2、FGF2、Wnt1)の遺伝子発現への影響を検討したところ、誘導因子無添加の細胞凝集塊はSSEA1の発現がみられなかったが、BMP2またはFGF2によって発現が誘導された。FGF2によりSox2, Msx1, Pax6そしてGATA2が誘導された。定量PCRの結果でもFGF2でSox2とMsx1の著しい発現上昇が確認された。つまりFGF2が脂肪由来細胞を神経板へ誘導することが考えられる。またBMP2+WntlによりAP2とSnail2が発現しGATA2の発現はみられなかった。これらの結果よりBMP2+Wnt1が神経堤細胞へ誘導することが示唆された。しかし、2段階においてシュワン細胞マーカーの発現が誘導されなかったことより、分化誘導方法のさらなる検討が必要である。本成果は一部のマーカーのみの検討であり、さらにマーカーを増やすことや定量的な解析が必要である。また遺伝子のレベルだけではなく、タンパクレベルでのさらなる解析も必要である。

[Objective] This study aims to establish a new method for the establishment of neuroregenerative therapy, including cell culture of adipocytes. Adipose-derived cells are induced to differentiate into neurons by two-stage induction. [Methods] Adipose-derived cells without serum-free agglutination (SFEBq) culture method: During 7 days of culture, cell differentiation inducing factors were added to the cells, and cell aggregates of the cells were formed (stage 1). After that, Fibronectin was added to the culture dish to seed the cell aggregates, and the differentiation inducing factor was added to the culture dish for 7 days (2 stages). The mRNA expression of stage 1 and stage 2 was analyzed by RT-PCR in undifferentiated cells (SSEA1), neuroplates (Sox2, Msx1), neurotubules (Pax6), epidermis (GATA2), neurotubules (CD271, AP2, Snail2), and neurocytes (Sox10, GFAP, Krox20). [Research results] Using fat derived cells to attract subcutaneous fat Cell surface antigen CD13,29,44,73,90,105,106 positive, CD14,31,45 negative, fat, cartilage, bone bud cell differentiation was confirmed. Before induction, SSEA1 was detected, and other cells were identified. To investigate the effects of the gene expression of BMP2, FGF2, Wnt1 on the development of SSEA1 in the absence of the addition of BMP2, FGF2, Wnt1. FGF2, Sox2, Msx1, Pax6 and GATA2 are all induced. Quantitative PCR results confirmed that FGF2, Sox2 and Msx1 were detected in the middle of the rise. FGF2 is derived from fat cells and is induced in the nervous system. BMP2+Wntl: AP2 + Snail2: GATA2: GATA2 The result is that BMP-2+Wnt-1 can induce the growth of neurons. It is necessary to investigate the induction and differentiation methods of cell differentiation in the second stage. The results of this study are as follows: It is necessary to analyze the contents of the document.