Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａがｍｉＲＮＡ動態によって強毒性を獲得するメカニズム

L。

• 批准号: 26930011
• 负责人: 古城 剛
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26930011/
• 关键词: Legionella pneumophila; microRNA; apoplosis

【目的】本研究は、Legionella pneumophilaがヒト単球由来マクロファージに感染した際にmiRNAの質的・量的変化を解析する。miRNAの質的・量的変化によりL. pneumophilaが増殖し病原性を獲得するメカニズムを解明する。【方法】①L. pneumophiliaは、BCYE培地で2日間・37℃培養した。②THP-1細胞(ヒト単球系統)、U937細胞は、RPMI1640培地(10% FCS, 4.5mM glutamine)で培養し100ng PMAを添加しマクロファージに分化させた細胞をL. pneumophiliaに感染させた。③MOI0、1、10、100で感染させた細胞は、3、6、12時間のそれぞれで解析した。④細胞死の有無は、LDHまたはPI法で確認した。⑤感染細胞のカスパーゼ1をウエスタンブロットで確認した。感染後の細胞株の抵抗性まず、THP-1抵抗性・感受性における感染細胞でmiR-155, miR-22, miR-96, miR1271の4種のmiRNAの質的・量的変化を確認した。⑥現在のその他の菌種で既知のmRNAまたはバイオインフォマティクス(targetScan等)または文献を利用して標的蛋白質の予想を行った。【結果】MOI 1で感染させたmiR-155は、時間依存的に増加した。また反対にMOI100で感染させたmiR-155は、時間依存的に減少する。細胞障害性(LDH)の測定は、MOI 100で感染させた細胞で24時間後に細胞死をおこす事が示唆された。今後、細胞死をおこす24時間でMOI 0, 1, 10, 100のmicroRNAアレイを用いて、細胞死とLegionellaの増殖に関連するmiRNAを探索する予定である。また、ウェスタンブロティングやノックダウンさせた細胞をもちいてmicroRNAの変化を解析する予定である。

[Purpose] This study is to analyze the quality and quantity of the microRNA infected by Legionella pneumophila and its origin. Qualitative and quantitative changes in the miRNA were obtained by L. pneumophila and its pathogenicity was determined by the understanding of the pathogenic factors. [Method] ① L. pneumophilia and BCYE culture were cultured at 37°C for 2 days. ②THP-1 cells (ヒトspheroid system), U937 cells, and RPMI1640 cultured cells (10% FCS, 4.5mM glutamine) were cultured and 100ng PMA was added to differentiate the cells. pneumophilia is infected. ③ MOI0, 1, 10, and 100 are used to infect cells and analyzed at 3, 6, and 12 times. ④Confirm the presence or absence of cell death and LDH by PI method. ⑤ Confirmation of infection of cells. After infection, the resistance and THP-1 resistance and susceptibility of the cell lines were confirmed, and the qualitative and quantitative changes of the four types of miRNA, namely miR-155, miR-22, miR-96, and miR1271, were confirmed. ⑥Now it is known that the strain of bacteria is known as mRNAまはバイオインフォマティクスTargetScan, etc.) are based on literature that utilizes target proteins. [Results] MOI 1 was infected with miR-155 and time-dependent was increased. The anti-infection of MOI100 and the infection of miR-155 are time-dependent. The cytotoxicity (LDH) was measured and the cells were infected with MOI 100 and the cells died after 24 hours. From now on, cell death and Legionella 24 time MOI 0, 1, 10, 100 microRNA microRNA use and cell death Legionella reproduction and exploration are scheduled to be determined.また、ウェスタンブロティングやノックダウンさせたcell をもちいてmicroRNAの変化をanalyticsするpredeterminedである.