Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａがｍｉＲＮＡ動態によって強毒性を獲得するメカニズム

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【目的】本研究は、Legionella pneumophilaがヒト単球由来マクロファージに感染した際にmiRNAの質的・量的変化を解析する。miRNAの質的・量的変化によりL. pneumophilaが増殖し病原性を獲得するメカニズムを解明する。【方法】①L. pneumophiliaは、BCYE培地で2日間・37℃培養した。②THP-1細胞(ヒト単球系統)、U937細胞は、RPMI1640培地(10% FCS, 4.5mM glutamine)で培養し100ng PMAを添加しマクロファージに分化させた細胞をL. pneumophiliaに感染させた。③MOI0、1、10、100で感染させた細胞は、3、6、12時間のそれぞれで解析した。④細胞死の有無は、LDHまたはPI法で確認した。⑤感染細胞のカスパーゼ1をウエスタンブロットで確認した。感染後の細胞株の抵抗性まず、THP-1抵抗性・感受性における感染細胞でmiR-155, miR-22, miR-96, miR1271の4種のmiRNAの質的・量的変化を確認した。⑥現在のその他の菌種で既知のmRNAまたはバイオインフォマティクス(targetScan等)または文献を利用して標的蛋白質の予想を行った。【結果】MOI 1で感染させたmiR-155は、時間依存的に増加した。また反対にMOI100で感染させたmiR-155は、時間依存的に減少する。細胞障害性(LDH)の測定は、MOI 100で感染させた細胞で24時間後に細胞死をおこす事が示唆された。今後、細胞死をおこす24時間でMOI 0, 1, 10, 100のmicroRNAアレイを用いて、細胞死とLegionellaの増殖に関連するmiRNAを探索する予定である。また、ウェスタンブロティングやノックダウンさせた細胞をもちいてmicroRNAの変化を解析する予定である。