機関内で研究に用いられるヒト細胞株の誤認証の実態把握と品質管理システムの確立

了解机构内用于研究的人体细胞系虚假鉴定的实际情况，建立质量控制体系

• 批准号: 26931023
• 负责人: 武田 英雄
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26931023/
• 关键词: ヒト細胞株; キャピラリーシーケンサー; STR解析

機関内で研究に用いられるヒト細胞株の認証に関する品質管理システムを確立するために、部門で共通機器として保有するキャピラリーシーケンサー (Applied Biosystems 3130 ジェネティックアナライザ) を活用し、標準的16ローカスを標的とするShort Tandem Repeat(STR)解析システムを構築した。機関内で用いられSTRパターンが公開されているヒト細胞株を収集し、ゲノムDNAを抽出して、Multiplex PCR後にシーケンサーで泳動することでSTR解析を実施し、STRパターンの比較により細胞株種の識別が可能であることを確認した。期待するパターンと異なる結果を示す細胞を検出しなかったことから、A549肺癌細胞株の親株から表現型に違いのある複数の子株(独立するクローン)ならびにA549に遺伝子導入後にクローン化した中から表現型に差があるクローンをモデルとして提供を受け、クローン間での表現型の違いがクロスコンタミネーションによるものでないことを検証する実験系に計画を変更した。その結果、異なる子株(クローン)間では、マーカーの1つで繰り返し数が異なるパターンを示すものが検出されたが、informativeなマーカーのほとんどは一致していた。これは、A549の親株の細胞中に遺伝的な不均一性を持つクローン(clonalvariation)があり、これが表現型の違いに関与している可能性があるものの、亜株の範囲に留まり他の細胞株のクロスコンタミによるものではないことを示しており、研究における細胞認証の重要性が示された。以上から、現在まで機関内での誤認証は確認されていないものの、本研究を基に研究者への啓蒙と定期的なサーベイランスによる誤認証の防止システム確立に役立つ「機関内でのヒト細胞株認証サービスを柱とする誤認証監視システム構築」につながる成果が得られた。

In the research of the machine, the quality management equipment is used to make sure that the equipment is in place, and the common machine in the department is responsible for the maintenance of the equipment (Applied Biosystems 3130). The standard is 16 years old, and the standard is 16 years old. The Short Tandem Repeat (STR) is used to analyze the information system. In the machine, the STR equipment was used to make sure that the cell strains were collected, the DNA was extracted, and the swimming activity was detected after the Multiplex PCR. The STR analysis was performed, and the STR analysis was performed. It is expected that the results show that the cells of lung cancer cell line A549 lung cancer cell line, and cell line of A549 lung cancer cell line, the cell line, the cell line I don't know what to do. I don't know. I don't know. I don't know. The results of the test, the results of the tests, the results of the experiments, the results of the tests, the results of the experiments, the results of the tests, the results of the experiments, the results of the tests, the results The heterogeneity in the cells of A549 strain and A549 strain is different from that of other cell lines. The heterogeneity in the cells of A549 strain is different from that in the cells of A549 strain, A549 strain and A549 strain. In this study, the researchers in this study are responsible for the prevention and control of health care in order to prevent the establishment of health care equipment. In this study, the researchers in this study are responsible for the prevention of the establishment of health care equipment.