权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

脳発達においてアストロサイト由来の神経栄養因子が果たす役割

星形胶质细胞源性神经营养因子在大脑发育中的作用

基本信息

批准号：
08770571
负责人：
浅井清文
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770571/
关键词：
グリア細胞成長因子アストロサイト EIA cDNAクローニング

项目摘要

研究方法1、グリア細胞成長因子(GMF)の酵素抗体法による定量法の確立リコンビナント蛋白に対するポリクローナル抗体を使用し、抗体固相化ビーズとβ-galactosidaseでラベルした抗体を使用したサンドイッチEIA法を確立を試みた。2、ヒト・グリア細胞成長因子(GMF) cDNAのクローニングラットGMF cDNAをプローブとして、ヒト胎児脳cDNAライブラリーをスクリーニングし、ヒトGMF cDNAのクローニングを行った。3、グリア細胞成長因子のアストロサイトへの遺伝子導入アストロサイトへ発現ベクターを使用しcDNAを導入し、GMFをover expressionしたグリア細胞株を樹立を試みた。研究結果1、定法に従いサンドイッチEIA法を確立を試みたところ、GMFリコンビナント蛋白に対しては測定できることが判明したが、測定感度が十分でなく実験に使用するまでには至らなかった。今後、さらに抗体価の高い抗血清を作成し、測定感度を良くする方針である。2、スクリーニングの結果、4131bpのcDNAをクローニングした。(DDBJ Accession No. AB001106)。3、発現ベクターpKCRにラットGMF cDNAをクローニングした。このベクターをリポフェクション法によりラット初代培養アストロサイトに導入しGMFをover expressionしたグリア細胞株を樹立をした。Over expressionの状態は、ノーザンブロットおよびウエスタンブロットにより、mRNAおよび蛋白質レベルの両方にて確認した。今後、この細胞株を用いてGMFの機能解析を行う予定である。

Method 1. Establishment of GMF by enzyme antibody method and quantitative method. Use of GMF antibody and antibody immobilization. Establishment of GMF by EIA method. 2. GMF cDNA is the most important gene in human genome. GMF cDNA is the most important gene in human genome. 3. The gene expression of cell growth factor is introduced into the cell culture system. The gene expression of cell growth factor is introduced into the cell culture system. Results 1. The method of EIA was established to determine the sensitivity of protein. In the future, the production of high-level antiserum for antibody detection will be carried out. 2. The results of the gene conversion, 4131bp cDNA conversion. (DDBJ Accession No. AB001106)。3, The development of pKCR gene expression system The cell line was established by introducing GMF into the primary culture medium. Over expression status is determined by the expression of mRNA and protein. In the future, the use of this cell line to analyze the function of GMF will be determined.