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リン酸化がレチノイドXレセプターの転写活性とDNA結合に及ぼす影響に関する研究

磷酸化对视黄醇X受体转录活性及DNA结合影响的研究

基本信息

批准号：
08770807
负责人：
菅原明
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770807/
关键词：
レチノイドレセプターリン酸化転写調節 DNA

项目摘要

Cキナーゼによるリン酸化がどのようにレチノイドXレセプター(RXR)による転写調節を修飾するかを明らかにする目的で以下の実験を行った。CV-1細胞に各RXR(α.β.γ)のcDNA発現プラスミド、及びRXR反応DNA領域(DR1)を含んだリポータープラスミドを、補正用RSV-β-galactosidase発現プラスミドとともにco-トランスフェクションした。9-cisレチノイン酸(9cRA)又はTPAを添加してのインキュベーションの後に、細胞抽出液をルシフェラーゼアッセイに供じた。その結果、TPAはRXRα,β,γ各アイソフォームにおいて、9cRAと同様の転写活性の上昇を引き起こすことが認められた。TPA及び9cRAを同時に添加したところ、RXRαおよびβにおいては相加的な転写活性の上昇のみが認められたのに対して、RXRγにおいては相乗的な転写活性の上昇が認められた。各RXRアイソフォームは、N端部分を除いては殆ど共通の構造を有していることが知られている。RXRγのN端ドメインには、RXRαおよびβのN端ドメインには存在していないCキナーゼによる推定リン酸化部位が複数個存在することから、現在それらの推定リン酸化部位の変異株をsite-directed mutagenesisにより作製中である。これらの変異株を用いてトランスフェクションおよびルシフェラーゼアッセイを行うことにより、TRAと9cRAによるRXRγの相乗的な転写活性の上昇にN端部分のCキナーゼ推定リン酸化部位がどのように関与しているかを今後明らかにしていく予定である。

The following actions were taken to modify the structure of the system: CV-1 cells contain RXR(α.β.γ) cDNA expression profile, and RXR reverse DNA domain (DR1) include the following: RSV-β-galactosidase expression profile, correction and co-expression profile. 9-cis-4-methyl-acetic acid (9-cRA) was added to the cell extract after the addition of TPA. As a result, TPA has been shown to increase the activity of RXRα,β,γ and 9cRA. TPA and 9cRA are added simultaneously, and RXRα and β are added together to increase the activity. Each RXR has a common structure, such as the reverse and N-terminal parts. RXRγ N-terminal mutation, RXRα-β N-terminal mutation, site-directed mutation. The activity of RXRγ was increased in the N-terminal part of the protein, which was estimated to be acidified in the future.