活性型血小板膜受容体を認識するモノクローナル抗体の作成と血栓準備状態の診断

创建识别激活的血小板膜受体的单克隆抗体并诊断血栓形成准备情况

• 批准号: 08770865
• 负责人: 森木 隆典
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770865/
• 关键词: 血小板GPIb; IX複合体; 血小板型フォンビルブランド病; フォンビルブランド因子; 血栓準備状態; 活性型血小板

我々は、平成7年度までにCHO細胞を用いて活性型リコンビナント血小板膜糖蛋白GPIbα(M239V)を発現させ、さらにヒトGPIbαを発現するトラスジェニックマウスの作成にも成功していた。本年度においては、まず培養液中に含まれるM239Vを精製純化することに主眼がおかれた。当初は既存の抗GPIbαモノクローナル抗体を担体に結合させ、アフィニテイークロマトグラフイ-によりM239Vを純化することを試みたが成功しなかった。次にGPIbαと結合すると言われているトロンビンを担体に結合させ純化することを試みたところ目的を達することができた。この行程により分子構造変化が生じていないことを、抗GPIbαモノクローナル抗体との反応性が保たれていることにより確認した。さらにvon Willebrand factor(vWF)との結合性を評価することにより、純化M239Vが、野性型GPIbαと比較してvWFとの結合能の亢進という性質を保持していることを確認した。次に、ヒトGPIbαを発現するトランスジェニックマウスに、純化M239Vを繰り返し投与し、immunizationを行った。現在マウス脾臓由来のリンパ球をELISAを用いてスクリーニングしており、野性型GPIbαには反応せず、M239Vには反応するクローンを選別し、いくつかの候補を得た段階である。今後これらのクローンからハイブリドーマを作成し、目的とする活性型GPIbαを認識するモノクローナル抗体を得る予定である。

I 々 は, pp.47-53 7 year ま で に を CHO cells with い て activity type リ コ ン ビ ナ ン ト platelet membrane glycoproteins GPIb alpha (M239V) を 発 now さ せ, さ ら に ヒ ト GPIb alpha を 発 now す る ト ラ ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス の made に も successful し て い た. This year's に お い て は, ま ず medium, contains に ま れ る M239V を refined purification す る こ と に eye が お か れ た. Original は existing の GPIb resistant alpha モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody を supporter に combining さ せ, ア フ ィ ニ テ イ ー ク ロ マ ト グ ラ フ イ - に よ り M239V を purification す る こ と を try み た が successful し な か っ た. Time に GPIb alpha と combining す る と said わ れ て い る ト ロ ン ビ ン を supporter に combining さ せ purification す る こ と を try み た と こ を ろ purpose of す る こ と が で き た. こ の trip に よ り molecular structure - the が raw じ て い な い こ と を, GPIb alpha モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody と の anti 応 sex が bartender た れ て い る こ と に よ り confirm し た. さ ら に von Willebrand factor (vWF) と の associativity を review 価 す る こ と に よ り, purification M239V が, wild type GPIb alpha と comparison し て vWF と の binding energy の hyperthyroidism と い う nature を keep し て い る こ と を confirm し た. に, ヒ ト GPIb alpha を 発 now す る ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス に, purification M239V を Qiao り return し cast and し, immunization を line っ た. Now マ ウ ス splenic origin の リ ン パ ball を ELISA を with い て ス ク リ ー ニ ン グ し て お り, wild type GPIb alpha に は anti 応 せ ず, M239V に は anti 応 す る ク ロ ー ン を don't し, い く つ か の backup を should た Duan Jie で あ る. Future こ れ ら の ク ロ ー ン か ら ハ イ ブ リ ド ー マ を made し, purpose と す る activity type GPIb alpha を know す る モ ノ ク ロ ー ナ を ル antibodies to る designated で あ る.

项目成果

森木隆典,村田 満: "一次止血反応-血管,血小板,von Willebrand因子" medicina. 33巻7号. 1243-1246 (1996)

Takanori Moriki、Mitsuru Murata：“原发性止血反应 - 血管、血小板、血管性血友病因子”，医学杂志，第 33 卷，第 7 期，1243-1246（1996 年）。

森木隆典,池田康夫: "出血・血栓性疾患 -出血・凝固・線溶検査を中心に-" 臨床成人病. 27巻1号. 159-163 (1997)

Takanori Moriki、Yasuo Ikeda：“出血和血栓性疾病 - 关注出血、凝血和纤维蛋白溶解测试 -”《临床成人疾病》，第 27 卷，第 1 期。159-163 (1997)

森木隆典,池田康夫: "血小板膜糖蛋白質GPIb/IXを介するシグナル伝達" Molecular Medicine. 33巻8号. 918-922 (1996)

Takanori Moriki、Yasuo Ikeda：“血小板膜糖蛋白 GPIb/IX 介导的信号转导”《分子医学》第 33 卷，第 8 期。918-922 (1996)