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各種体細胞との共培養におけるマウス初期胚体外培養に関する研究

小鼠早期胚胎外培养与多种体细胞共培养的研究

基本信息

批准号：
08771325
负责人：
廣瀬雅哉
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Shiga University of Medical Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771325/
关键词：
マウス初期胚共培養マクロファージ

项目摘要

今回、数種の体細胞を用いた胚の共培養を試み、より高い胚発生効率が得られるか、また、その効果が何によってもたらされるか、そしてその後の着床現象にいかなる効果をもたらすかなどについて動物実験モデルを用いた検討を行った。1、ヒト皮膚線維肉腫細胞、同脂肪肉腫細胞ではDay3、Day5においてそれぞれ4細胞期胚発育率、胚盤胞発育率はコントロールに比べ有意に低値であり、共培養により胚発育はむしろ抑制された。子宮内膜上皮細胞との共培養においてもDay5での胚盤胞率はコントロールに比べ有意に低値であった。卵管上皮細胞はcontrolと比べ有意な差は認められなかった。しかし腹腔マクロファージはマウス、モルモットの種にかかわらずcontrolに比しDay5の胚盤胞率が有意に高値を示した。2、これらの結果から、胚発育促進効果の見られたモルモットマクロファージとの共培養に関してさらに検討を加え、以下の結果を得た。(1)共培養に用いた腹腔マクロファージの細胞数に依存して胚発生効率が上昇した。(2)conditioned medium添加実験では、freshあるいはfreezed mediumにかかわらず、有意にに胚発生効率が低下した。(3)conditioned medium中のアミノ酸組成の検討までは、明らかな胚発生促進物質を認めなかった。(4)培養上清中の合計13種類のサイトカイン、growth factorを測定したが、ほとんど検出感度以下であり、唯一、IL-1βのみ検出された。プロスタグランジン類の定量では、6-keto-PGF1α、TXB2、PGE2、PGF2αが検出されたが、インドメタシンを添加しても胚発生にはなんら影響を及ぼさなかった。

In this paper, several kinds of somatic cells were used in embryo co-culture, and the high embryo development rate was obtained, and the results were discussed. 1. The embryo development rate and blastoderm cell development rate of 4-cell stage were lower than those of control group on Day3 and Day5. The embryo development rate and blastoderm cell development rate of co-culture were lower than those of control group on Day 3 and Day 5. Endometrial epithelial cells co-cultured on Day5 had a significantly lower blastoderm cell rate than those cultured on Day 5. Oviduct epithelial cells are controlled by the control system. The percentage of blastoderm cells on Day5 is intentionally high. 2. The results of this study were as follows: (1)The number of cells in co-culture increased significantly. (2)Conditioned medium is added slowly, fresh, frozen medium is added slowly, and the rate of embryo growth is low intentionally. (3) The composition of the acid in the conditioned medium is discussed. (4)A total of 13 species of IL-1β were detected in culture supernatant. 6-keto-PGF1 α, TXB2, PGE2 and PGF2 α were detected quantitatively and the effects of different factors on embryo development were investigated.